miR-155对肾小管上皮细胞转分化的影响及其机制研究
本文关键词:miR-155对肾小管上皮细胞转分化的影响及其机制研究
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【摘要】:目的·研究miR-155在慢性肾脏疾病(CKD)患者血清中的表达情况,探讨miR-155是否通过下调Kriippel样因子4(KLF4)影响肾小管上皮细胞转分化(EMT)。方法·收集126例CKDⅠ期患者、163例CKDⅢ期患者以及130例正常体检人员的血清,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组患者血清中miR-155的表达情况。在细胞实验中,用10μg/L TGF-β诱导肾小管上皮细胞EMT,通过转染miR-155 mimic和miR-NC至离体培养的肾小管上皮细胞中,光学显微镜下观察细胞形态变化。Transwell试验检测细胞的迁移侵袭能力,免疫印迹试验(Westernblotting)检测细胞中平滑肌α-肌动蛋白(SMα-actin)、胶原蛋白Ⅰ(collagenⅠ)、胶原蛋白Ⅳ(collagenⅣ)、钙黏着蛋白-E(E-cadherin)的表达情况。生物信息学预测miR-155潜在靶基因为KLF4,利用荧光素酶试验验证KLF4是miR-155的靶基因;再通过转染过表达KLF4的质粒至肾小管上皮细胞,检测细胞中SMα-actin、collagenⅠ、collagenⅣ、E-cadherin、KLF4的表达情况。结果·相比于正常人群组和CKDⅠ期患者,miR-155在CKDⅢ期患者血清中的表达降低。在细胞实验中,相比于空质粒组,转染miR-155 mimic后,肾小管上皮细胞中SMα-actin、collagenⅠ、collagenⅣ、KLF4的表达减少,E-cadherin表达增加;荧光素酶试验结果显示,miR-155能够显著降低含KLF4-3'-UTR序列质粒的荧光素酶活性;转染过表达KLF4质粒后,肾小管上皮细胞中SMα-actin、collagenⅠ、collagenⅣ表达增加,E-cadherin表达减少。结论·在CKD患者血清中,miR-155低表达;miR-155可以通过下调KLF4从而抑制肾小管上皮细胞EMT。
【作者单位】: 兰州大学第二医院肾内科;兰州大学第二医院风湿科;
【关键词】: 慢性肾功能不全 miR- Krüppel样因子 肾小管上皮细胞转分化
【基金】:甘肃省自然科学基金(1308RJZA246)~~
【分类号】:R692
【正文快照】: 慢性肾脏疾病(chronic kidney disease,CKD)是指各种原因造成慢性进行性肾实质损害,致使肾脏明显萎缩,不能维持基本功能,临床出现以代谢产物潴留,水、电解质、酸碱平衡失调,全身各系统受累为主要表现的临床综合征。慢性肾脏疾病的发病机制尚未完全明确,目前的研究发现肾小管上
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