USP26基因突变与男性无精子症的相关性

发布时间：2017-10-21 07:43

  本文关键词：USP26基因突变与男性无精子症的相关性

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【摘要】：近年来,不孕不育已经成为一个世界性问题,在众多导致不孕不育的原因中,男性不育症所占比重已经高达50%。在男性不育症中,无精子症的发病率日益增高,其发病率已高达15%-20%。其原因复杂、因素之多给临床诊治带来了很多困难。随着临床先进技术的应用,部分导致男性不育症的病因已被确定,如遗传性疾病:常染色体或性染色体异常;睾丸本身病变:如睾丸外伤、炎症、扭转以及睾丸血管病变;内分泌疾病、垂体功能亢进、垂体肿瘤、肾上腺功能亢进或低下、甲亢或甲低,均可影响精子生成而造成无精子症。但目前仍有部分病例无法探知其确切的病理机制。造成男性不育的原因主要有:染色体畸形病变、Y染色体生精基因的缺失与突变及X染色体上生精基因的突变。泛素特异蛋白酶26基因是位于X染色体上,该基因与雄性不育具有相关性。泛素蛋白酶归属于去泛素化酶(DUB)家族,这种酶可对泛素与蛋白质的结合产生拮抗作用,并对蛋白质的异常降解有降低的作用,而该基因的突变把该酶的这种作用在某种程度上进行了抑制,泛素特异蛋白酶26(USP26)基因编码由913个氨基酸组成的蛋白质,该基因位于Xq26.2,由2794个碱基组成,仅有单一外显子,隶属与男性不育症相关的众多候选基因之一,属于去泛素化酶家族,其特异表达于睾丸,插入突变和点突变为其常见的突变类型,对于与该基因生理功能相关的研究目前仍很少。本实验通过研究USP26基因多态性在无精子症患者与其在正常男性中的表达差异,通过seqman软件分析比对基因测序结果,确定泛素特异蛋白酶26基因在259-1206、长度为947bp的基因片段中突变的方式和位点,可能对了解及揭示无精子症发生的某些机制,对部分男性无精子症的诊断及针对性治疗有某些重要的意义。目的通过seqman软件分析比对基因测序结果,确定泛素特异蛋白酶26基因在259-1206、长度为947bp的基因片段中突变的方式和位点,确定无精子症患者泛素特异蛋白酶26(USP26)基因多态性与男方无精子症的关系。材料和方法1.实验材料:根据WHO精液检测标准,精液离心后取沉渣镜检,3次均未发现精子可确诊为无精子症,无精子症可以分为梗阻性与非梗阻性两大类型,排除因输精管道缺如(如输精管、精囊缺如)或输精管道阻塞(输精管结扎、射精管梗阻)等所致梗阻性无精子症及染色体畸形病变、Y染色体微缺失等。选取2013年1月-2013年9月来郑州大学第三附属医院生殖中心就诊的50例非梗阻性无精子症患者作为病例组,同时取50例男方生育力正常者作为对照组,排除因男性不育实施过手术治疗或通过辅助生殖技术获得生育者。清晨空腹采集病例组及对照组上肢静脉血3ml,将所采集标本移置EP管并保存于-20℃待测。2.研究方法:严格按照试剂盒使用方法提取病例组及对照组外周血DNA,PCR方法扩增患者外周血基因组获得泛素特异蛋白酶26基因片段,通过seqman软件分析比对基因测序结果,确定泛素特异蛋白酶26基因在259-1206、长度为947bp的基因片段中突变的方式和位点。3.统计学方法:运用seqman软件分析测序结果,采用SPSS 17.0统计学软件进行数据分析。病例组与对照组之间的差异使用X2检验,双侧检验水准α=0.05,P0.05为具有统计学意义。结果1.所选病例组及对照组,无染色体畸形病变及Y染色体微缺失。2.基因测序分析结果显示:在所测的259-1206基因片段中,50例对照组均未检测到USP26基因的突变,但在50例病例组中有12例存在USP26基因复合突变,其中主要表现为363-364位点插入了ACA及494位点T置换成C,其余位点未见突变。3.在所测结果中,50例无精子症患者中有12例患者在363-364位点插入ACA及494位点T置换成C,突变的同时伴随有氨基酸序列的改变,其突变率为24%,X2=13.636,P=0.000(0.005),具有统计学意义。4.正常生育组未见突变。P=1(0.05),无统计学意义。结论1.男性无精子症的发生与USP26基因突变存在某种联系,这种基因突变可能会在某种程度上造成精液质量的严重下降或在一定程度上调控精子的发生,进而导致男性无精子症。2.泛素特异性蛋白水解酶26可特异性的在精子产生的多个阶段及睾丸组织中表达,这种酶可降解蛋白质。该酶可以对泛素前体进行活化,是组成泛素-蛋白酶途径的一部分,参与蛋白质的降解及功能发挥,进而在精子形成过程中起着非常重要的作用。
【关键词】：泛素特异性蛋白水解酶 USP26 基因突变 男性无精子症
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R698.2
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 中英文缩略词12-13
• 1 引言13-17
• 2 实验标本、试剂及仪器17-20
• 3 实验方法20-25
• 4 实验结果25-28
• 5 讨论28-32
• 6 结论32-33
• 附图33-34
• 参考文献34-37
• 综述 无精子症病因的相关性探讨37-57
• 参考文献52-57
• 个人简历 在学校期间发表的学术论文和研究成果57-58
• 致谢58

【共引文献】

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 孙擎;分泌型多肽TAT-CT3-cMyc对白血病HL-60细胞的生长调节[D];第二军医大学;2011年

2 彭国庆;甲醛诱导雌性大鼠卵巢及子宫毒性研究[D];中南大学;2011年

3 朱小东;鼻咽癌后程加速超分割放射治疗的临床及实验研究[D];广西医科大学;2007年

4 于光艳;甲醛联合苯对幼鼠骨髓细胞毒性及其相关机制的研究[D];吉林大学;2008年

5 陈雪梅;邻苯二甲酸二丁酯和苯并[a]芘对雄性大鼠的联合生殖毒性研究[D];重庆医科大学;2009年

6 吴成秋;居室空气甲醛与苯污染的生殖和胚胎发育毒性及其作用机制研究[D];中南大学;2010年

7 邱庆明;若干生精细胞相关基因功能初步研究[D];中南大学;2009年

8 张玮;泛素特异性蛋白酶Usp46和Usp26基因错义突变对去泛素化酶活性的影响及其流行病学意义[D];河北医科大学;2013年

9 武阳;瞬时受体电位通道和神经肽表达上调在甲醛诱导型支气管哮喘小鼠模型中的作用[D];华中师范大学;2013年

10 董媛;染色体异常与睾丸生精障碍相关研究[D];吉林大学;2014年

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本文编号：1072111