12-脂氧化酶对鼠肾小球Ezh2表达的影响及机制研究

发布时间：2017-10-25 09:36

  本文关键词：12-脂氧化酶对鼠肾小球Ezh2表达的影响及机制研究

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【摘要】：肾脏纤维化是慢性肾脏病的共同病理特征,主要表现为细胞外基质（extracellular matrix,ECM）成分的积聚、肾小球硬化和肾小管间质纤维化的形成。在肾脏纤维化过程中,肾小球硬化、小管间质纤维化、炎性细胞浸润以及肾实质的丢失(小管萎缩、毛细血管闭塞、足细胞耗竭)共同参与了其发生和发展。肾脏纤维化为慢性肾脏病进展至终末期肾病的共同通路，因此积极了解肾脏纤维化的形成机制及影响肾脏纤维化的因素进一步指导临床治疗极其重要。阻断引起肾脏纤维化相关的作用通路可能是一种有效的阻止进展至终末期肾病的治疗靶点。新兴的研究结果表明，，组蛋白修饰在肾脏疾病、终末期肾病和肾脏纤维化进展中起到关键作用。多种细胞因子，趋化因子和生长因子在基质的形成和降解中协同作用，导致ECM的积聚失衡，最终引起肾小球硬化和间质纤维化。在血管内皮和肾脏细胞中，12-脂氧化酶(12-lipoxygenase,12-LO)代谢产物12(S)HETE具有重要的促增殖及炎性因子作用，12-LO能够通过其代谢产物引起肾小球ECM积聚导致肾脏纤维化。组蛋白甲基转移酶Ezh2（enhancer of zeste homolog2,Ezh2）的表达变化与肾脏纤维化的关系以及12-LO对肾小球Ezh2表达调节的影响与肾脏纤维化的关系尚不明确。 方法： 本研究采用肾小球系膜细胞培养的方法，应用RT-PCR、Western blot、转染等方法探讨12-LO是否通过p38MAPK通路调控Ezh2导致肾小球纤维化，以及观察12-LO和Ezh2在肾脏纤维化中的作用。 结果： 1、抑制p38活性可有效阻断12(S)HETE诱导的系膜细胞（mesangialcells,MC）内p38活性和Ezh2蛋白表达减少，差异有统计学意义（P 0.01）和CTGF的mRNA表达增加，差异有统计学意义（P 0.05）。 2、野生型小鼠系膜细胞（mouse mesangial cells,MMC）和12-LO基因敲除小鼠系膜细胞(12lipoxygenase knockout mesangial cells,12-LOKO MC)相比，12LOKO MC Ezh2蛋白水平明显高于MMC，差异有统计学意义（P 0.01），同时CTGF的mRNA表达水平明显低于MMC，差异有统计学意义（P 0.05）。 3、大鼠系膜细胞转染NTC或siEzh2，转染siEzh2的RMC，CTGF的mRNA水平明显高于转染NTC，差异有统计学意义（P 0.05）。 结论： 1、肾小球中12-LO通过p38MAPK途径调节Ezh2表达，进而调控CTGF的表达。 2、12-LO通过下调Ezh2上调CTGF引起肾脏纤维化。
【关键词】：12-脂氧化酶 Ezh2 CTGF 系膜细胞 肾小球
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R692
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 文献综述11-21
• 1.1 肾脏纤维化的发病机制研究进展11-12
• 1.2 炎症反应在肾脏纤维化的作用12-15
• 1.2.1 生长因子在肾脏纤维化的作用12-13
• 1.2.2 血管活性因子在肾脏纤维化中的作用13-14
• 1.2.3 表观遗传学在肾脏纤维化的作用14-15
• 1.3 表观遗传学及其调控15-19
• 1.3.1 组蛋白修饰15-16
• 1.3.2 组蛋白甲基化与肾脏纤维化16
• 1.3.3 组蛋白修饰酶 Ezh216-19
• 1.4 12-脂氧化酶与肾脏纤维化19-21
• 第2章 材料与方法21-30
• 2.1 实验材料21-24
• 2.1.1 细胞系21
• 2.1.2 所用试剂21-22
• 2.1.3 主要仪器22-23
• 2.1.4 主要试剂配制23-24
• 2.2 实验方法：24-30
• 2.2.1 肾小球分离及系膜细胞培养（包括 SD 大鼠，清洁级野生型（WT）和 12-LO 基因敲除 C57BL/6 小鼠）24
• 2.2.2 实验分组24-25
• 2.2.3 蛋白印迹杂交（Western Blot）25-27
• 2.2.4 cDNA 制备27-28
• 2.2.5 Amaxa 协同转染肾小球系膜细胞28-29
• 2.2.6 结果分析与统计学处理29-30
• 第3章 结果30-35
• 3.1 观察 SB203580 对 12(S)HETE 诱导的 SD 大鼠系膜细胞 Ezh2 表达的影响30-32
• 3.2 观察野生型小鼠系膜细胞和 12LOKO 小鼠系膜细胞对 Ezh2 和CTGF 表达的影响32-33
• 3.3 观察大鼠系膜细胞转染 NTC 或 siEzh2 对 Ezh2 和 CTGF 表达影响33-35
• 第4章 讨论35-38
• 第5章 结论38-39
• 参考文献39-45
• 作者简介及在学期间所取得的科研成果45-46
• 致谢46

【参考文献】

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1 杨敏,黄海长,李惊子,王海燕;结缔组织生长因子增加TGFβ活化成肌纤维细胞的作用[J];基础医学与临床;2005年01期

本文编号：1093148