利用体内噬菌体展示技术筛选膀胱癌特异性结合肽

发布时间：2017-11-03 15:03

  本文关键词：利用体内噬菌体展示技术筛选膀胱癌特异性结合肽

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【摘要】：目的:利用体内噬菌体展示技术筛选与人膀胱移行细胞癌特异性结合的小分子多肽。方法:将人膀胱移行细胞癌细胞BIU87接种于裸鼠体内,制备膀胱癌荷瘤小鼠模型,尾静脉注射噬菌体展示环七肽库,然后筛选与膀胱移行细胞癌特异性结合的含外源多肽的噬菌体,经过3轮体内筛选后,免疫组织化学法及ELISA法鉴定单克隆噬菌体对BIU87的亲和力。提取阳性单克隆噬菌体单链DNA进行测序,并推导出外源多肽氨基酸序列,化学合成多肽、制备分子探针后采用激光扫描共聚焦显微镜术及流式细胞术鉴定多肽对膀胱癌细胞和组织的特异性。结果:3轮体内筛选后,噬菌体富集率达到4.334×102倍。免疫组化结果显示,肿瘤组织中噬菌体肽的含量随着每一轮筛选呈增长趋势,且结合逐渐增强,同时由于噬菌体经肝、肾代谢,可见肝脏结合大量非特异性的噬菌体。ELISA结果显示,随机挑选的30个单克隆噬菌体斑中,有24个阳性噬菌体,其中10个噬菌体对BIU87有较强的亲和力,对其测序并推导出3种多肽序列,重复率最高的序列CSSPIGRHC(8/10)命名为NYZL1。化学合成FITC-C6-NYZL1,通过激光扫描共聚焦显微镜术、流式细胞术均证明多肽NYZL1可以特异性结合膀胱癌细胞。结论:利用体内噬菌体展示技术筛选出了与人膀胱移行细胞癌特异性结合的小分子多肽NYZL1,为膀胱癌早期诊断和靶向治疗提供一定的理论依据。
【作者单位】： 山西医科大学微生物学与免疫学教研室;山西医科大学第一医院泌尿外科;
【基金】：国家自然科学基金项目(81172444)
【分类号】：R737.14
【正文快照】： 膀胱癌(Bladder carcinoma)是最常见的泌尿系统恶性肿瘤之一,其中75%~85%为浅表性膀胱肿瘤,又称为非肌肉浸润性肿瘤(Non muscle invasivebladder tumor,NMIBC)。虽然采取膀胱癌手术及术后综合疗法显著提高了患者5年生存率,但因膀胱癌早期血尿常可自行减轻或停止,易给患者造成

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本文编号：1136680