BCG诱导形成的NETs在膀胱癌治疗中作用机制的相关研究

发布时间：2017-12-15 05:24

  本文关键词：BCG诱导形成的NETs在膀胱癌治疗中作用机制的相关研究

  更多相关文章： 卡介苗 膀胱癌 NETs PBMCs 细胞 免疫

【摘要】：目的:探讨中性粒细胞胞外捕获网(neutrophil extracelluar traps,NETs)对膀胱癌T24细胞迁移、侵袭的影响及NETs对外周血单个核细胞(PBMCs)增殖、细胞因子表达的影响;探讨NETs对小鼠膀胱肿瘤生长及膀胱肿瘤中CD3表达的影响。方法:将卡介苗(BCG)与中性粒细胞共同培养4小时诱导NETs形成,制备NETs悬液;取不同浓度NETs与膀胱癌T24细胞共同培养,通过划痕实验、Transwell实验方法,分析NETs对膀胱癌T24细胞迁移、侵袭的影响;取不同浓度NETs与PBMCs共同培养,通过CCK-8、流式细胞术及ELISA法,分析NETs对PBMCs增殖、PBMCs细胞表面CD4、CD8的表达和PBMCs分泌Th1型细胞因子TNF-α及IFN-γ的水平。建立Balb/c小鼠皮下膀胱肿瘤模型,将BCG诱导形成的NETs悬液皮下注射,同时设立阴性对照组,观察小鼠的一般状况和肿瘤生长情况;摘取肿瘤,对肿瘤组织标本行HE染色,观察肿瘤病理情况;进行CD3免疫组织化学染色,检测膀胱肿瘤中免疫细胞的分布情况。结果:1.划痕实验和Transwell迁移实验结果显示:不同浓度NETs与膀胱癌T24细胞共同培养后,实验组(1×NETs组和2×NETs组)与对照组相比,膀胱癌T24细胞迁移能力明显减弱,差异有统计学意义(P0.05)。2.Transwell侵袭实验结果显示:不同浓度NETs与膀胱癌T24细胞共同培养后,实验组(1×NETs组和2×NETs组)与对照组相比,膀胱癌T24细胞侵袭穿过小室的细胞数量明显减少,差异有统计学意义(P0.05)。3.不同浓度的NETs作用于PBMCs细胞后,NETs能够明显促进PBMCs细胞增殖,随着NETs浓度增加,PBMCs细胞增殖作用逐渐减弱。4.流式细胞术结果显示:实验组(0.5×NETs组及2×NETs组)PBMCs细胞CD4表达量与对照组相比明显增加,差异有统计学意义(P0.05),0.5×NETs组与2×NETs组相比无明显差异;PBMCs细胞CD8表达量各组之间均无明显差异。5.不同浓度NETs与PBMCs共同培养后,PBMCs细胞在不同时间点(24h、48h、72h)分泌TNF-α及IFN-γ的水平与对照组相比明显增加,随着NETs浓度增加,PBMCs细胞分泌TNF-α及IFN-γ的水平逐渐降低,差异有统计学意义(P0.05)。6.在小鼠皮下注射NETs悬液14天后,摘除肿瘤,NETs组小鼠皮下肿瘤体积和肿瘤重量均明显小于阴性对照组;另外,HE染色病理结果显示均为恶性肿瘤细胞;7.免疫组化检测结果显示:NETs组肿瘤组织中CD3细胞阳性数较阴性对照组明显增加,差异有统计学意义(P0.001)。结论:1.BCG诱导形成的NETs在体外能够抑制膀胱癌细胞迁移和侵袭作用。2.NETs可以促进PBMCs细胞的增殖作用,并能促进PBMCs细胞表面CD4的表达和Th1型细胞因子表达的上调,从而通过发挥免疫调节作用,促进NETs的抗肿瘤作用。3.在小鼠皮下膀胱肿瘤模型中,NETs能够抑制肿瘤生长,并能够活化肿瘤组织中淋巴细胞,发挥免疫活化作用。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.14

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 青云;英国科学家辨别出与膀胱癌有关的基因[J];中国处方药;2004年08期

2 ;特殊激素可导致男性患膀胱癌几率升高[J];中国社区医师(综合版);2007年11期

3 肖建利;张丽芳;刘巧莉;;白花蛇舌草治疗膀胱癌1例[J];临床合理用药杂志;2009年08期

4 丁虹彬，，余雪轩;培养膀胱癌细胞的新方法[J];南京医学院学报;1994年01期

5 张晓峰;刘训勤;;一种新型膀胱癌快速诊断装置[J];医疗卫生装备;2013年10期

6 孙宏志,凡杰,唐孝达;自稳定反义IGF1R基因片段对膀胱癌细胞的影响[J];中华泌尿外科杂志;2000年05期

7 章小平,杨红枚,鲁功成;膀胱癌稳定表达多药耐受相关蛋白亚克隆的生物学特征[J];中华实验外科杂志;2000年03期

8 漆少廷,徐锡坤,王心如;膀胱癌的分子生物学研究进展[J];国外医学.泌尿系统分册;2000年04期

9 章小平,杨红枚,鲁功成;流式细胞仪在膀胱癌多药耐受研究中的应用[J];临床泌尿外科杂志;2000年09期

10 杨莉,汪少娟,杨业金,陈忠,吴燕丽;抗肿瘤药对膀胱癌细胞产生的免疫抑制因子作用的影响[J];药物流行病学杂志;2000年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 张永春;谷江;孙发;石家齐;;传统医学在膀胱癌治疗中的意义[A];2010年贵州省泌尿外科学术会议论文集[C];2010年

2 潘春武;沈周俊;唐小莹;王e

本文编号：1290786