肾母细胞瘤过表达基因对人骨肉瘤143B细胞增殖、凋亡和迁移的影响

发布时间：2017-12-17 07:20

  本文关键词：肾母细胞瘤过表达基因对人骨肉瘤143B细胞增殖、凋亡和迁移的影响

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【摘要】：目的:探讨肾母细胞瘤过表达(nephroblastoma overexpressed,NOV)基因对人骨肉瘤细胞143B增殖、凋亡和迁移的影响及其可能的作用机制。方法:分别采用半定量反转录聚合酶链反应(reverse transcriptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)和蛋白质印迹法筛选NOV低表达的骨肉瘤细胞株。将重组腺病毒Ad NOV和Ad GFP(空载体阴性对照组)分别感染骨肉瘤143B细胞,培养24 h后,在荧光显微镜下观察重组腺病毒Ad NOV和Ad GFP在143B细胞中的感染效率,并通过半定量RT-PCR和蛋白质印迹法检测NOV m RNA和蛋白在143B细胞中的表达情况。分别采用MTT法、FCM法和Transwell小室法检测NOV过表达对143B细胞增殖、凋亡及迁移的影响;半定量RT-PCR法及蛋白质印迹法检测NOV过表达的143B细胞中NOV、抗凋亡因子B细胞淋巴瘤基因-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)表达水平的变化以及磷酸化p38(phospho-p38,p-p38)、总p38、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(phospho-c-Jun N-terminal kinase,p-JNK)和总JNK表达水平的变化。结果:NOV在骨肉瘤细胞143B中的表达水平最低(P0.05)。荧光显微镜下观察发现,重组腺病毒Ad NOV在143B细胞中的感染效率约为60%;NOV在143B细胞中成功过表达(P0.05)。NOV过表达可抑制143B细胞的增殖(P0.05),将细胞周期阻滞于G0/G1期(P0.05),促进了143B细胞的凋亡(P0.001);并可提高143B细胞的迁移能力(P0.001)。NOV过表达后,143B细胞中促凋亡因子Bax表达上调(P0.001),抑制凋亡因子Bcl-2表达下降(P0.05);同时,p-p38与p-JNK表达水平均显著上调(P0.001)。结论:腺病毒介导的NOV过表达抑制了骨肉瘤143B细胞的增殖,促进了其凋亡和迁移,其作用机制可能与p38/丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivated protein kinase,MAPK)和JNK/MAPK信号通路的激活有关。
【作者单位】： 重庆医科大学检验医学院 临床检验诊断学教育部重点实验室;
【基金】：国家自然科学基金资助项目(编号:81102035)~~
【分类号】：R737.11
【正文快照】： YAO Juan,WENG Ya-guang,YAN Shu-juan,HOU Meng-yi,SHI Qiong,ZUO Guo-wei结果:NOV在骨肉瘤细胞143B中的表达水平最低(P0.05)。荧光显微镜下观察发现,重组腺病毒Ad NOV在143B细胞中的感染效率约为60%;NOV在143B细胞中成功过表达(P0.05)。NOV过表达可抑制143B细胞的增殖(P0

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本文编号：1299244