过表达及沉默细胞黏附分子1基因膀胱癌细胞株的构建

发布时间：2017-12-18 00:10

  本文关键词：过表达及沉默细胞黏附分子1基因膀胱癌细胞株的构建

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【摘要】：目的构建过表达及沉默细胞黏附分子1(CADM1)基因的膀胱癌细胞株。方法培养并收集膀胱癌细胞株T24。1过表达CADM1基因T24细胞构建:将T24细胞分为1、2、3组,real-time PCR扩增CADM1基因全长,与慢病毒载体p HBLV-IRES-Zs Green-PGK-puro进行连接(1组),并设载体对照组(2组)和空白对照(3组);经酶切及测序鉴定正确后在293T细胞中包装病毒,病毒浓缩后感染T24细胞。2沉默CADM1基因T24细胞构建:将T24细胞分为A、B、C、D、E组,设计3条针对CADM1基因的干扰序列(siRNA1/2/3)分别与载体p HBLV-U6-shRNA-ZsGreen-Puro进行连接(A、B、C组),D组与p HBLV-U6-Zs Green-Puro进行连接,E组为空白对照;经双酶切、PCR及测序鉴定连接载体,在293T细胞中包装病毒,病毒浓缩后感染T24细胞。采用real-time PCR检测T24细胞中的CADM1 mRNA,Western blotting法检测CADM1蛋白。结果过表达和沉默CADM1基因的慢病毒载体及细胞株均正确构建。1、2、3组CADM1 mRNA相对表达量分别为4.84±0.02、1.12±0.03、1.00±0.00,CADM1蛋白相对表达量分别为4.53±0.03、1.05±0.04、1.00±0.01,1组CADM1 mRNA及蛋白相对表达量高于2、3组(P均0.05)。A、B、C、D、E组CADM1 mRNA相对表达量分别为0.28±0.05、0.98±0.02、0.74±0.01、0.99±0.01、1.00±0.00,CADM1蛋白相对表达量分别为0.33±0.04、0.86±0.12、0.67±0.07、1.00±0.04、1.00±0.03,A组CADM1 mRNA及蛋白相对表达量低于B、C、D、E组(P均0.05)。结论成功构建了过表达及沉默CADM1基因的膀胱癌细胞株T24。
【作者单位】： 天津医科大学第二医院;天津市泌尿外科研究所;
【基金】：天津市自然科学基金重点项目(12JCZDJC23700)
【分类号】：R737.14
【正文快照】： 膀胱癌是我国最常见的泌尿系统肿瘤,膀胱癌的预后与多种因素相关[1,2]。近年来,许多肿瘤标记物相继被发现可用于膀胱癌的预后判断。细胞黏附分子1(CADM1)是2001年由Kuramochi等[3]在人类非小细胞肺癌(NSCLC)中发现的一种抑癌基因。大量研究显示,CADM1在食管癌[4]、黑色素瘤[5]

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本文编号：1302072