高分辨质谱筛选IgA肾病新尿液生物标志物及临床验证
本文关键词：高分辨质谱筛选IgA肾病新尿液生物标志物及临床验证 出处：《中国人民解放军医学院》2016年硕士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：背景和目的：IgA肾病(IgA nephropathy, IgAN)是世界上最常见的原发性肾小球病,也是导致慢性肾脏病(chronic kidney disease, CKD)和终末期肾病(end-stage renal disease, ESRD)最主要的原因。目前肾穿刺活检是诊断IgAN的金标准。作为一种有创性检查,肾穿刺活检存在一定风险且不宜反复进行。在此基础上,寻找IgAN的无创生物标志物具有重要意义。本研究通过高分辨质谱检测IgAN患者和正常人的尿液蛋白质,筛选IgAN潜在的尿液生物标志物并进行临床验证,探讨其应用价值并对IgAN的发病机制进一步阐明。方法：(1)挑选2014年8月至2015年1月于解放军总医院肾科经首次肾穿刺活检诊断为IgAN的20-50岁患者共24例(Lee分级Ⅲ级、Ⅲ-Ⅳ级、Ⅳ级、Ⅳ-Ⅴ级和V级分别为13例、4例、5例、1例和1例),另挑选血常规、血生化、尿常规检查无异常且无基础疾病的20-50岁正常人共30例。收集24例IgAN和30例正常人晨起第2次中段尿,通过Lable free LC/MS高分辨质谱技术对24例IgAN患者和30例正常人尿液蛋白质进行检测,筛选其中的差异蛋白质。对差异蛋白质进行GO (Gene Ontology)分析和信号通路富集；(2)根据质谱检测和数据分析结果,结合IgAN可能的发病机制,选择补体C3、C4、表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)、铁代谢相关的3个蛋白质包括转铁蛋白(transferrin, TF)、铜蓝蛋白(ceruloplasmin, CP)、乳铁蛋白(Lactoferrin, LTF)、通过酶联免疫吸附试验(ELISA)对上述标志物在10例IgAN、10例IMN、10例MCD和10例正常人中进行验证。并对上述标志物和常用临床病理指包括血肌酐(serum creatinine, SCr)、尿素氮(urea nitrogen, UN)、24h尿蛋白定量、肾小球滤过率(estimated glomerular filtration rate, eGFR)及肾脏组织补体C3沉积程度进行相关性分析。结果：(1)高分辨质谱检测发现共有394个尿液蛋白质在IgAN组和正常人组间存在差异表达。仅在IgAN组检测到的尿液蛋白质共有77个。IgAN组和正常人组中均存在但差异表达的尿液蛋白质共有317个,其中152个尿液蛋白质在IgAN组中升高,165个尿液蛋白质在IgAN组中降低。GO分析和信号通路富集发现有意义的差异尿液蛋白质主要参与脂质代谢、凝血和血栓形成、铁离子代谢、补体系统激活、细胞粘附、细胞运动、钙离子信号通路、MAPK信号通路等生物过程或信号通路；(2)利用ELISA方法对上述尿液蛋白质进行验证,发现IgAN组、IMN组和MCD组尿液补体C3、C4、TF和CP水平均较NC组显著升高。其中,尿液TF在疾病组均升高100倍以上。IgAN组、IMN组和MCD组尿液EGF均较NC组显著降低。但尿液补体C3、C4、TF、CP和EGF在疾病组组间无显著差异。MCD组尿液LTF水平较NC组、IgAN组和IMN组均显著降低,但尿液LTF水平在NC组、IgAN组和IMN组组间无显著差异。此外,IgAN组尿液补体C3和C4分别与24h尿蛋白定量呈显著正相关,IgAN组尿液EGF与24h尿蛋白定量呈显著负相关。结论：本研究通过高分辨质谱检测,确定了IgAN特异的尿液蛋白质表达谱。通过ELISA方法对差异蛋白进行验证,考虑尿液TF可能作为肾脏疾病早期诊断的生物标志物。尿液补体C3、C4、EGF、TF、CP和LTF组合可能可以作为区分MCD和IgAN、IMN的一组生物标志物。此外,尿液补体C3、C4和EGF可能可以与24h尿蛋白定量共同反映IgAN的活动性。
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R692.31
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