rHuEPO对肾间质纤维化过程中炎症因子的影响及其可能作用机制

发布时间：2018-01-31 23:41

  本文关键词： RhoA/ROCK信号通路 清蛋白 HK-细胞 IL- 肿瘤坏死因子α rHuEPO　出处：《医学研究生学报》2015年06期 　论文类型：期刊论文

【摘要】：目的临床治疗虽可延缓肾间质纤维化进展,却无法逆转肾功能丧失。探讨重组人促红细胞生成素(recombinant human erythropoietin,r Hu EPO)对肾间质纤维化过程中炎症因子的影响及其可能作用机制。方法将体外培养的HK-2细胞随机分为7组:空白对照组、r Hu EPO对照组(20 U/m L r Hu EPO)、清蛋白刺激组(5 mg/m L清蛋白)、5 U/m L r Hu EPO干预组(5 mg/m L清蛋白+5 U/m L r Hu EPO)、10 U/m L r Hu EPO干预组(5 mg/m L清蛋白+10 U/m L r Hu EPO)、20 U/m L r Hu EPO干预组(5 mg/m L清蛋白+20 U/m L r Hu EPO)、Rho激酶抑制组(10μmol/L Y27632+5 mg/m L清蛋白),各组均作用24 h。观察各组细胞形态的变化;RT-PCR检测各组细胞Rho A、ROCK1 mRNA及白细胞介素-6因子(interleukin-6,IL-6)mRNA含量水平;ELISA检测细胞上清液中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF-α)、IL-6蛋白的含量表达。结果空白对照组、r Hu EPO干预组显示鹅卵石或者铺路石样形态,清蛋白刺激组表现出细长梭状改变,呈现纤维细胞样外观。5、10、20 U/m L r Hu EPO干预组细胞向鹅卵石样复转,Rho激酶抑制组细胞形态呈椭圆形、细胞间隙稍增大;与空白对照组比较,清蛋白刺激组Rho A、ROCK1 mRNA及IL-6 mRNA显著升高(P0.05),而5、10、20 U/m L r Hu EPO干预组逐渐下调(P0.05),且与r Hu EPO浓度负相关;与清蛋白刺激组比较,Rho激酶抑制组ROCK1 mRNA、IL-6 mRNA表达下调(P0.05),但Rho A mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。ELISA结果显示:清蛋白刺激组上清液TNF-α、IL-6蛋白[(1 347.54±41.52)ng/L、(884.62±0.73)pg/L]表达较空白对照组[(452.32±33.23)ng/L,(95.12±0.32)pg/L]显著增高(P0.05),5、10、20 U/m L r Hu EPO干预组、Rho激酶抑制组TNF-α表达[(1 003.32±3.42)、(821.32±21.32)、(590.15±7.68)、(488.13±65.03)ng/L)]较清蛋白刺激组[(1 347.54±41.52)ng/L]下降(P0.05)、IL-6蛋白表达[(656.68±0.55)、(422.35±0.22)、(217.32±0.35)、(309.49±0.21)pg/L]亦较清蛋白刺激组[(884.62±0.73)pg/L]下降(P0.05),5、10、20 U/m L r Hu EPO干预组组间两两比较差异均有统计学意义(P0.05)。结论 r Hu EPO可能通过减少炎症因子的产生来抑制清蛋白诱导的HK-2细胞转分化过程,其作用机制部分涉及Rho A/ROCK信号通路。
[Abstract]:Objective Clinical treatment can delay the progress of renal interstitial fibrosis. But the renal function loss could not be reversed. To investigate the recombinant human erythropoietin of recombinant human erythropoietin. The effect of rHu EPO on inflammatory factors in renal interstitial fibrosis and its possible mechanism. Methods HK-2 cells cultured in vitro were randomly divided into 7 groups: blank control group. R Hu EPO control group 20 U / m L r Hu EPO, albumin stimulation group 5 mg/m L albumin). 5 渭 r Hu EPO intervention group (5 mg/m / L albumin 5 U / L r Hu EPO). 10 渭 r Hu EPO intervention group (5 mg/m / L albumin 10 U / mL Hu Hu EPO). 20 U / M L r Hu EPO intervention group, 5 mg/m L albumin 20 U / L r Hu EPO). Rho kinase inhibition group (10 渭 mol/L Y276325 mg/m / L) was treated for 24 h. The changes of cell morphology in each group were observed. RT-PCR was used to detect the levels of Rho AtroCK1 mRNA and interleukin-6 interleukin-6 (IL-6) mRNA in the cells of each group. ELISA was used to detect the expression of TNF- 伪 and IL-6 in the supernatant of tumor necrosis factor.Results A blank control group was used to detect the expression of TNF- 伪 and IL-6 in the supernatant. R Hu EPO intervention group showed cobblestone or paving stone shape, while albumin stimulation group showed slender fusiform change, showing fibrocell-like appearance. The cells in 20 U / M LR Hu EPO treated group showed elliptical shape and slightly enlarged intercellular space to the cobblestone type of Rho kinase inhibition group. Compared with the blank control group, the Rho Atrock 1 mRNA and IL-6 mRNA in the albumin stimulated group were significantly higher than those in the control group (P 0.05 and P 0.05, respectively). In 20 U / M L r Hu EPO intervention group, P0.05 was down-regulated gradually, and negatively correlated with rHu EPO concentration. Compared with the control group, the expression of ROCK1 mRNA-IL-6 mRNA in Rho kinase inhibited group was down-regulated (P0.05). But there was no significant difference in the expression of Rho A mRNA. The results of Elisa showed that the supernatant TNF- 伪 IL-6 protein was stimulated by albumin. [The expression of 1 347.54 卤41.52ng / L + 884.62 卤0.73 PG / L] was higher than that of the blank control group. [452.32 卤33.23 ng / L, 95.12 卤0.32 g / L, significantly increased P0.05ng-1 路L ~ (-1). TNF- 伪 expression in Rho kinase inhibitory group treated with 20 Ur Hu EPO. [(1 003.32 卤3.42) (821.32 卤21.32) (590.15 卤7.68). 488.13 卤65.03 ng / L] compared with albumin stimulation group. [1 347.54 卤41.52ng / L] decreased the expression of IL-6 protein in P0.05. [656. 68 卤0. 55 Pg / L 422.35 卤0.22. 35 卤0. 22. 32 卤0. 35 + 30. 49 卤0. 21 g / L were also higher than those stimulated by albumin. [884. 62 卤0. 73 g / L] decreased P0. 05 P0. 05 g / L 10. There were statistically significant differences between 20 U / M LR Hu EPO intervention groups (P 0.05). Conclusion r Hu EPO may inhibit the transdifferentiation of HK-2 cells induced by albumin by reducing the production of inflammatory factors. The mechanism is partly related to the Rho A / R rock signaling pathway.
【作者单位】： 南昌大学第二附属医院肾内科;九江市第一人民医院;江西省肿瘤医院乳腺外科;
【基金】：江西省教育厅课题(GJJ12107) 江西省自然科学基金(20122BAB205006)
【分类号】：R692.5
【正文快照】： 0引言肾间质纤维化(Renal interstitial fibrosis,RIF)是各种原发性或继发性病因导致的慢性肾病(chro-nic kidney disease,CKD)进展的共同病理途径,最终依赖肾替代治疗维持患者生命。迄今,临床使用的治疗方案虽可延缓RIF的进展,但无法遏制甚至逆转肾功能的丧失。多种细胞因子

【参考文献】

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本文编号：1480308