mTOR信号通路在碘普罗胺诱导的人源肾小管上皮细胞凋亡中的作用

发布时间：2018-03-07 19:29

本文选题：哺乳动物雷帕霉素靶蛋白　切入点：对比剂急性肾损伤　出处：《天津医科大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：目的本研究旨在探讨碘普罗胺(优维显)对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(Mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的影响以及雷帕霉素(Rapamycin,RAP)和溶血磷脂酸(Lysophosphatidic acid,LPA)能否通过此信号通路调节碘普罗胺造成的细胞凋亡,进而为临床治疗对比剂急性肾损伤(Contrast induced acute kidney injury,CIAKI)提供新思路,为相关信号通路靶点药物的研发提供理论基础。方法1.将人源肾小管上皮细胞(HK-2)分为六组,即正常对照组(C组)、碘普罗胺对照组(M组)、雷帕霉素高剂量组(R1组)、雷帕霉素低剂量组(R2组)、溶血磷脂酸高剂量组(L1组)和溶血磷脂酸低剂量组(L2组)。C组加入无血清的细胞培养液;M组加入含碘普罗胺的无血清培养液;R1组加入含碘普罗胺的无血清培养液和高剂量的雷帕霉素;R2组加入含碘普罗胺的无血清培养液和低剂量的雷帕霉素;L1组加入含碘普罗胺的无血清培养液和高剂量的溶血磷脂酸;L2组加入含碘普罗胺的无血清培养液和低剂量的溶血磷脂酸。应用Western blotting法测定碘普罗胺对mTOR下游信号通路相关蛋白及磷酸化蛋白表达的影响;在碘普罗胺刺激的基础上,应用不同浓度的雷帕霉素和溶血磷脂酸分别作用24h和48h,测定这两种药物对mTOR下游信号通路相关蛋白及磷酸化蛋白表达的影响。2.将人源肾小管上皮细胞(HK-2)分为四组,即正常对照组(C组)、碘普罗胺对照组(M组)、雷帕霉素组(R组)和溶血磷脂酸组(L组)。C组加入无血清的细胞培养液;M组加入含碘普罗胺的无血清培养液;R组加入含碘普罗胺的无血清的细胞培养液和雷帕霉素;L组加入含碘普罗胺的无血清的细胞培养液和溶血磷脂酸。用流式细胞仪测定不同时间点的碘普罗胺对HK-2细胞凋亡的影响以及雷帕霉素和溶血磷脂酸对碘普罗胺诱导的细胞凋亡的干预作用。结果应用Western blotting法检测结果显示,各组的24h Total-mTOR含量表达无明显改变(P0.05),但是碘普罗胺组的p-mTOR、Total-P70S6K、p-P70S6K、Total-4EBP1、p-4EBP1含量表达比正常对照组低(P0.05);雷帕霉素组的p-mTOR、Total-P70S6K、p-P70S6K、Total-4EBP1、p-4EBP1含量表达比碘普罗胺组少(P0.05),但雷帕霉素高低剂量组间各蛋白含量表达无明显差异(P0.05);溶血磷脂酸组的p-mTOR、Total-P70S6K、p-P70S6K、Total-4EBP1、p-4EBP1含量表达比碘普罗胺组多(P0.05),但溶血磷脂酸高低剂量组间各蛋白含量表达无明显差异(P0.05)。各蛋白及磷酸化蛋白在48h的表达趋势和24h的变化趋势大致相同,且碘普罗胺组和雷帕霉素组的p-mTOR、Total-P70S6K、p-P70S6K、Total-4EBP1、p-4EBP1含量表达呈时间依赖性减少(P0.05),而溶血磷脂酸组的p-mTOR、Total-P70S6K、p-P70S6K、Total-4EBP1、p-4EBP1含量表达呈时间依赖性增多(P0.05)。应用流式细胞仪检测结果显示,碘普罗胺组比正常细胞组的细胞凋亡率明显升高(P0.05),且碘普罗胺组48h的细胞凋亡率比24h的细胞凋亡率高(P0.05)。雷帕霉素组和溶血磷脂酸组的细胞凋亡率均比碘普罗胺组的细胞凋亡率低(P0.05);R组24h的细胞凋亡率高于L组24h的细胞凋亡率(P0.05),R组48h的细胞凋亡率低于L组48h的细胞凋亡率(P0.05);雷帕霉素组48h的细胞凋亡率低于24h的细胞凋亡率(P0.05);溶血磷脂酸组48h的细胞凋亡率较24h的细胞凋亡率无统计差异(P0.05)。结论1.mTOR信号通路参与了碘普罗胺诱导的人源肾小管上皮细胞的凋亡。2.碘普罗胺下调细胞内的mTOR信号通路相关蛋白mTOR、P70S6K以及4EBP1的磷酸化活化水平,诱导细胞凋亡。3.溶血磷脂酸通过激活mTOR信号通路,减轻了碘普罗胺对细胞内mTOR信号通路的磷酸化抑制作用,进而改善了碘普罗胺诱导的细胞凋亡。4.雷帕霉素可以抑制mTOR信号通路相关蛋白的活化表达,可能由于药物本身的“多效性”,亦可在一定程度上减轻对比剂造成的细胞凋亡。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R692.5

【参考文献】