雄激素受体剪切突变体促进前列腺癌细胞去势抵抗性生长的机制研究

发布时间：2018-03-12 17:17

  本文选题：前列腺癌　切入点：雄激素受体　出处：《吉林大学》2015年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：2012年的统计数据表明，在全球范围内，前列腺癌的发病率居男性恶性肿瘤的第二位，死亡率居第五位。近十余年来，我国前列腺癌的发病率和死亡率均明显上升，其发病率已位居我国男性恶性肿瘤的第七位。2011年，我国将前列腺癌研究列入国家“973”计划项目。 雄激素受体（Androgen Receptor, AR）在前列腺癌的发生和发展中具有关键作用。AR与其配体——雄激素结合后转移至细胞核，与靶基因启动子中的特异序列（雄激素反应元件，Androgen Response Elements, AREs）结合，从而调节靶基因的表达。前列腺特异性抗原（Prostate Specific Antigen, PSA）是受AR调节的重要靶基因之一，也是公认的前列腺癌诊断和预后的监测标志物。鉴于AR信号通路在前列腺癌发生与发展中的重要作用，内分泌疗法（或称雄激素剥夺疗法，Androgen DeprivationTherapy, ADT）一直作为治疗晚期前列腺癌的经典疗法。在我国，由于前列腺癌早期筛查未得到普及，大部分病人就诊时已是晚期，因此ADT是主要的治疗方法。 在ADT治疗初期，伴随病人血清中PSA浓度的降低，ADT对绝大多数病人具有较好的疗效，但几乎所有病人最终都会对该疗法产生抗性，并发展为去势抵抗性前列腺癌（Castration-Resistant Prostate Cancer, CRPC）。CRPC是前列腺癌治疗领域的难点，也是导致病人因前列腺癌而死亡的主要原因。美国食品和药物管理局最近批准的治疗CRPC的新型内分泌药物恩杂鲁胺（Enzalutamide）和阿比特龙（Abiraterone）都是以AR为靶点，阻止其活化。使用新药可使CRPC病人的存活期延长4-5个月，但绝大多数病人在服药数月后即对药物产生耐受性，并伴有血清PSA浓度的升高，提示病人CRPC细胞中AR信号通路再激活。 在CRPC中，AR剪切突变体（AR splice variants, AR-Vs）的表达量普遍高于激素依赖性前列腺癌（Hormone-Naive Prostate Cancer）。迄今为止，在前列腺癌细胞系及组织中共发现25种AR-Vs，其中AR-V7（又称AR3）及ARv567es是最具有临床意义的2种AR-Vs。相关临床研究表明，若前列腺癌组织中AR-V7高表达，则该病人手术后前列腺癌复发的几率更高；在CRPC组织中若存在AR-V7高表达或ARv567es的表达，则更易发生癌症的远端转移和病人的生存期缩短。而CRPC中AR-Vs表达上调可能是前列腺癌经ADT（包括恩杂鲁胺和阿比特龙）治疗后，CRPC生长与增殖的主要适应途径。 本研究通过细胞模型，揭示AR-Vs/AR-Vs、AR-FL/AR-Vs之间的相互作用，阐明AR-Vs调控靶基因表达的方式以及促进CRPC发生发展的分子机制。利用分子克隆技术将AR-FL、AR-V7及ARv567es的cDNA克隆至双分子荧光片段互补（BiFc）系统中，并通过脂质体转染的方法，分别将上述表达质粒转染至AR null前列腺癌细胞系PC-3中。Western Blot技术检测目的蛋白的表达情况；荧光显微镜观察转染后细胞中AR-Vs/AR-Vs及AR-FL/AR-Vs的二聚化情况，探寻发生二聚化的作用位点；流式细胞术对荧光强度进行量化；激光共聚焦显微镜观察二聚化的AR-Vs/AR-Vs及AR-FL/AR-Vs的细胞内定位；雄激素反应元件报告基因系统检测AR-Vs/AR-Vs二聚体及AR-FL/AR-Vs二聚体的转录活性；qRT-PCR检测AR-Vs/AR-Vs二聚体及AR-FL/AR-Vs二聚体对靶基因（UBE2C、PSA）表达的影响；SRB检测AR-Vs/AR-Vs二聚化及AR-FL/AR-Vs二聚化促进前列腺癌细胞去势抵抗性生长的影响。 Western blot结果表明，成功构建BiFc表达质粒BiFc-AR-FL、BiFc-AR-V7及BiFc-ARv567es；利用BiFc系统在荧光显微镜下观察及流式细胞术定量结果表明，AR-Vs/AR-Vs二聚化主要由D-box介导，而AR-FL/AR-Vs二聚化主要由FxxFL及D-box介导；激光共聚焦显微镜观察发现，AR-Vs二聚化对于其细胞定位并无影响，提示AR-Vs进入细胞核并不依赖于二聚化，而AR-FL/AR-Vs的二聚化对于AR-FL非雄激素介导的细胞核转移是必要的；雄激素反应元件报告基因及qRT-PCR结果显示，AR-Vs/AR-Vs二聚体及AR-FL/AR-Vs二聚体具有转录活性，可以调控其靶基因的表达；SRB结果表明，AR-Vs/AR-Vs二聚化或/和AR-FL/AR-Vs二聚化共同作用，可促进前列腺癌细胞去势抵抗性生长。 以上研究提示，在ADT条件下，AR-Vs可通过AR-Vs/AR-Vs和/或AR-FL/AR-Vs二聚体调控靶基因的表达，，促使前列腺癌细胞去势抵抗性生长。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.25

【共引文献】

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本文编号：1602526