丹酚酸A、C分子药对配伍对HSA诱导HK-2细胞内质网应激相关凋亡蛋白的影响

发布时间：2018-03-25 21:32

  本文选题：丹酚酸A　切入点：丹酚酸C　出处：《遵义医学院》2017年硕士论文

【摘要】：目的:研究丹酚酸A、C分子药对配伍对HSA诱导HK-2细胞的内质网应激相关凋亡蛋白的影响。方法:在体外培养HK-2细胞,并随机分成5组:正常组、模型组、丹酚酸A组(SalA组)、丹酚酸C组(SalC组)、丹酚酸A+C组(即配伍组,丹酚酸A、C按1:1的比例配伍)。同步化24h后,除正常组外,其余各组均给予HSA诱导造模,且3个给药组给予相应的药物干预共同培养。分组培养干预24h、48h、72h后收集细胞,采用免疫印迹法(WB)检测GRP78、ATF-4、Caspase-12和CHOP蛋白的定量表达;细胞免疫荧光技术检测CHOP、ATF-4蛋白的定位表达;流式细胞术(FCM)检测Caspase-3活化率和细胞凋亡率。结果:1.各时间段各组细胞凋亡率FCM检测:与正常组比较,三个时间段的模型组细胞凋亡率均明显增高(P0.05);与模型组比较,各给药组三个时间段的细胞凋亡率均明显降低(P0.05);各给药组比较,配伍组在三个时间段的凋亡率均明显低于SalA组、SalC组(P0.05),SalA、C组在24h、48h时间段差异无统计学意义(P0.05)。2.各时间段各组细胞Caspase-3活化率FCM检测:与正常组比较,三个时间段的模型组Caspase-3活化率均明显升高(P0.05);与模型组比较,各给药组在三个时间段的Caspase-3活化率均明显降低(P0.05);各给药组比较,24h时间段各给药组Caspase-3活化率无显著差异(P0.05),48h时间段配伍组、SalA组的Caspase-3活化率明显低于SalC组(P0.05),但SalA组、配伍组的Caspase-3活化率差异无统计学意义(P0.05),72h时间段配伍组Caspase-3活化率均明显低于SalA组和SalC组(P0.05)。3.各时间段各组细胞GRP78蛋白表达WB检测:与正常组比较,三个时间段模型组细胞GRP78的相对表达量均明显增多(P0.05);与模型组比较,各给药组在三个时间段的GRP78相对表达量均明显减少(P0.05);各给药组比较,24h时间段SalC组GRP78相对表达量较其他给药组明显减少(P0.05),各给药组GRP78在48h时间段的相对表达量差异无统计学意义(P0.05),72h时间段配伍组GRP78相对表达量较其他给药组明显减少(P0.05)。4.各时间段各组细胞Caspase-12蛋白表达WB检测:与正常组比较,模型组细胞在三个时间段的Caspase-12相对表达量均明显增多(P0.05);与模型组比较,各给药组在三个时间段的Caspase-12相对表达量均明显减少(P0.05);各给药组比较,配伍组在三个时间段的Caspase-12相对表达量均较其他给药组明显减少(P0.05)。5.各时间段各组细胞CHOP蛋白表达检测:(1)WB检测结果:与正常组比较,模型组细胞CHOP的相对表达量在三个时间段均明显增多(P0.05);与模型组比较,各给药组在三个时间段的CHOP相对表达量均明显减少(P0.05);各给药组比较,三个时间段配伍组CHOP相对表达量较其他给药组均明显减少(P0.05)。(2)细胞免疫荧光技术检测结果:CHOP阳性表达为绿色荧光信号,在HK-2细胞的表达部位主要位于细胞核。6.各时间段各组细胞ATF-4蛋白表达检测:(1)WB检测结果:与正常组比较,三个时间段模型组细胞ATF-4的相对表达量均明显增多(P0.05);与模型组比较,各给药组三个时间段ATF-4相对表达量均明显减少(P0.05);各给药组比较,三个时间段配伍组ATF-4相对表达量较其他给药组均明显减少(P0.05)。(2)细胞免疫荧光技术检测结果:ATF-4阳性表达为绿色荧光信号,在HK-2细胞的表达部位主要位于细胞核。结论:丹酚酸A、C及分子药对配伍对HSA诱导HK-2细胞的GRP78、Caspase-12、CHOP和ATF-4的表达及Caspase-3的活化起抑制作用,推测丹酚酸A、C及分子药对配伍可能通过影响HK-2细胞内内质网应激相关凋亡蛋白的表达,干预内质网应激凋亡相关途径,减少肾脏固有细胞的凋亡,从而在延缓肾脏纤维化的进程中起作用。
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本文编号：1664959