可溶性CD22作为B细胞活化标志物的临床意义及机制研究

发布时间：2018-03-31 11:43

  本文选题：可溶性CD22　切入点：肾移植　出处：《华中科技大学》2015年博士论文

【摘要】：第一部分sCD22在肾移植排斥反应患者血浆中的表达水平及临床意义 目的：可溶性CD22(sCD22)是断裂的CD22分子胞外段,目前免疫相关疾病中关于sCD22的研究甚少。我们推测,B细胞活化导致CD22转化为“暴露态”可能是sCD22产生的机制,sCD22可能是B细胞活化的血清标志物；因此,移植排斥反应中血清sCD22水平很可能升高。为了研究sCD22与移植排斥反应的相关性,我们尝试了在肾移植受者的血清中检测sCD22。 方法：我们采集了32例肾移植受者和15例健康志愿者的血清标本,将受试者分为三组：排斥组、功能稳定组和对照组。利用酶联免疫吸附法(ELISA),我们检测血清sCD22浓度,并分析其与临床资料的相关性。 结果：我们发现,发生排斥反应的肾移植受者相较于肾功能稳定受者和健康人群具有更高的sCD22水平,sCD222.5ng/ml对于肾移植排斥反应具有一定的诊断意义(敏感性54.17%,特异性73.91%)。但是,sCD22对于肾移植排斥反应的诊断敏感性较低,仅能对部分排斥反应作出诊断,而一小部分肾功能稳定受者的sCD22水平也呈轻度升高状态。 结论：我们在本实验中首次研究了肾移植受者血清sCD22的表达水平,初步证实了sCD22与移植排斥反应具有相关性,并有一定的诊断价值。为揭示sCD22这一新的炎症因子的临床意义和应用价值提供了新的研究方向,同时也为研究移植排斥反应提供了一个新的标志物。 第二部分sCD22在脓毒症患者血清中的表达水平及临床意义 目的：我们推测sCD22是B细胞活化的血清标志物,其在脓毒症患者血清中的表达水平可能升高。为了分析sCD22与脓毒症的相关性,并探讨其诊断意义,我们尝试在脓毒症患者血清中检测sCD22水平。 方法：我们共采集血清样本104例,其中严重脓毒症患者14例,脓毒症患者24例,局限性感染患者25例,非感染性SIRS患者26例,健康志愿者15例。利用酶联免疫吸附法(ELISA),我们分别检测了血清sCD22、降钙素原(procalcitonin, PCT)和白介素6(interleukin-6, IL-6)浓度,分析其与临床资料的相关性,并比较这三种因子对脓毒症的诊断意义。 结果：我们发现sCD22的血清浓度与革兰氏阴性细菌感染的严重程度具有明显的相关性,脓毒症患者的血清sCD22浓度高于非感染性SIRS和局限性感染患者,非感染性SIRS和局限性感染患者sCD22水平也高于健康人群,尤其在严重脓毒症患者,其血清sCD22水平更高。sCD22能够有效鉴别感染患者和非感染患者、全身性感染患者和局限性感染患者、以及脓毒症和非感染性SIRS患者,其诊断效力与PCT和IL-6相当。另外,sCD22与APACHE II评分的相关性高于PCT和IL-6。 结论：sCD22是一种非特异性炎症因子,对革兰氏阴性细菌性脓毒症具有诊断意义,其诊断价值与PCT和IL-6相当,并且sCD22在预后评估方面可能比PCT和IL-6具有更高的应用价值。 第三部分sCD22与B细胞活化相关性的实验研究 目的：分别在体内和体外研究sCD22与B细胞活化以及B细胞表面CD22“暴露态”的相关性,探讨sCD22产生的机制,以及sCD22表达水平在B细胞活化相关疾病中的变化规律。 方法：①体外实验：分别通过LPS刺激活化和唾液酸酶(sialidase)消化预处理,使B细胞表面CD22分子转化为暴露态,并通过ELISA法检测不同时间点细胞培养上清液中sCD22的浓度变化,并通过流式细胞术分析B细胞表面CD22的表达变化；②动物实验：分别通过腹腔注射LPS和盲肠结扎穿刺的方法构建小鼠脓毒症模型,检测血清sCD22水平和B细胞表面CD22的表达变化。 结果：在体外实验中,我们发现唾液酸酶预处理B细胞能够在12小时内导致sCD22水平轻度升高,但不能维持sCD22的持续上升；而LPS刺激能够在24小时以后导致sCD22水平的持续性升高,并于大约72小时达到高峰。体内实验中,CLP脓毒症小鼠和LPS脓毒症小鼠血清sCD22水平均持续升高,但前者在发病12小时以内即开始上升,后者在12小时之后开始上升。另外,体内外B细胞活化均可导致B细胞表面CD22的表达水平上调。 结论：sCD22与B细胞活化具有明显地相关性,可以作为B细胞活化的标志物。sCD22的产生是由于B细胞活化使细胞表面CD22的表达水平增加,同时使CD22转化为“暴露态”,增加了CD22分子胞外段的断裂几率,进而导致sCD22水平的升高。
[Abstract]:The level and clinical significance of sCD22 in the plasma of patients with renal allograft rejection
Objective: soluble CD22 (sCD22) is fracture of the CD22 extracellular domain, the immune related diseases research on sCD22 is very little. We speculate that B cell activation leads to the conversion of CD22 to "expose state" is a possible mechanism of sCD22, sCD22 may be serum B cell activation marker; therefore, graft rejection in response to the level of serum sCD22 is likely to increase. In order to study the correlation between sCD22 and allograft rejection, we tried to detect serum sCD22. in renal transplantation recipients.
Methods: We collected serum samples from 32 cases of renal transplant recipients and 15 healthy volunteers. The subjects were divided into three groups: rejection group, stable function group and control group. Using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), we detected the serum concentration of sCD22, and analyze its correlation with clinical data.
Results: we found that the occurrence of renal allograft recipients with stable renal function of recipients and healthy people with higher levels of sCD22 and sCD222.5ng/ml for renal allograft rejection has certain diagnostic value (sensitivity 54.17%, specificity 73.91%). However, the sensitivity of sCD22 for diagnosis of renal allograft rejection is low. Only on the part of the rejection of the diagnosis, and a small part of stable renal function recipients sCD22 levels also showed a slight increase.
Conclusion: in this experiment we studied for the first time in renal transplantation the expression levels of serum sCD22, confirmed that sCD22 is associated with rejection, and has certain diagnostic value. It provides a new research direction in order to reveal the new sCD22 inflammation clinical significance and application value, but also provides a new marker of graft rejection.
The expression level and clinical significance of the second part of sCD22 in the serum of patients with sepsis
Objective: we speculate that sCD22 is a serum marker for B cell activation, and its expression level may increase in the serum of patients with sepsis. In order to analyze the correlation between sCD22 and sepsis and explore its diagnostic significance, we try to detect sCD22 level in serum of sepsis patients.
Methods: We collected serum samples from 104 patients, including 14 cases of patients with severe sepsis, 24 cases of patients with sepsis, 25 patients with localized infection, infection in 26 cases of non SIRS patients and 15 healthy volunteers. Using enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA), we detected the serum sCD22, drop procalcitonin (procalcitonin, PCT) and interleukin 6 (interleukin-6, IL-6) concentration, and analyze its correlation with clinical data, and compare these three factors for sepsis diagnosis.
Results: we found that sCD22 has a strong correlation with the serum concentration of gram negative bacteria infection severity, serum sCD22 concentration in patients with sepsis was higher than that of non infectious SIRS and limitations of infection in patients with non infectious SIRS and sCD22 levels in patients with localized infection is high in healthy population, especially in patients with severe sepsis the serum level of sCD22, higher.SCD22 can effectively identify patients infected and non infected patients, patients with systemic infection and patients with localized infection, and sepsis and non infectious SIRS patients, the diagnostic effect with PCT and IL-6. In addition, the correlation between sCD22 and APACHE II score higher than that of PCT and IL-6.
Conclusion: sCD22 is a non-specific inflammatory factor and has diagnostic significance for gram-negative bacterial sepsis. Its diagnostic value is similar to that of PCT and IL-6, and sCD22 has higher application value in prognosis evaluation than PCT and IL-6.
Experimental study on the correlation between the third parts of sCD22 and B cell activation
Objective: in vivo and in vitro, we studied the correlation between sCD22 activation and B cell activation and CD22 "exposed state" on B cell in vivo and in vitro, and explored the mechanism of sCD22 production, as well as the change rule of sCD22 expression level in B cell activation related diseases.
Methods: in vitro experiment: activation and sialidase were stimulated by LPS (sialidase) digestion pretreatment, the B cell surface CD22 molecules into exposure States, and detected by ELISA at different time points of cell culture supernatant sCD22 concentration, expression and analyzed by flow cytometry B cell surface CD22 the animal experiments were established; the sepsis model in mice by intraperitoneal injection of LPS and cecal ligation and puncture, the expression level of serum sCD22 and B cell surface CD22 detection.
Results: in vitro experiments, we found that sialidase pretreatment of B cells within 12 hours resulted in slightly elevated sCD22 level, rising but not for sCD22; and in 24 hours after LPS stimulation can lead to persistent high levels of sCD22, reached the peak in about 72 hours. In vivo, CLP sepsis and sepsis in mice LPS mice serum sCD22 levels were increased, but the former within 12 hours of onset has risen, the latter began to rise after 12 hours. In addition, activation can lead to B cell surface CD22 up-regulated expression of B cells in vivo.
Conclusion: the activation of sCD22 and B cells have obvious correlation, can be activated as a B cell marker.SCD22 is produced by the activation of B cells increased the expression level of cell surface CD22, and the conversion of CD22 to "expose state", increase the fracture of CD22 extracellular domain of several rates, resulting in higher levels of sCD22.

【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R699.2

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