H19衍生的miR-675在膀胱癌中的表达及其对细胞生物学行为影响的研究

发布时间：2018-04-10 19:41

本文选题：膀胱癌 + H19　；参考：《南京医科大学》2016年博士论文

【摘要】：背景和目的：膀胱癌是世界上第九大最常见的癌症,在2012年,全世界有429,793新发病例,并且有165,068人死于此病。它在男性中发病率是女性的3倍多,并且在所有男性癌症中排行第六位。膀胱癌有不同的病理组织学形态及临床表现,因此,给膀胱癌的治疗控制带来了一些障碍。已经证实长链非编码RNA19(H19)能够促进膀胱癌细胞的增殖和转移。然而,对于H19的成熟产物——miR-675如何促进膀胱癌的细胞增殖,我们还知之甚少。本研究的目的是研究miR-675在膀胱癌组织中的表达及探讨其对肿瘤细胞细胞增殖的影响及可能的作用机制,为临床膀胱的治疗提供新的靶点。方弦：采用qRT-PCR技术,研究了miR-675在膀胱癌组织、邻近正常组织、健康人膀胱组织及膀胱癌细胞系中的表达情况。接着,我们构建了使H19过表达的pcDNA-H19质粒并设计了使H19敲除的H19-siRNA,转染到253J细胞中,通过细胞增殖实验和qRT-PCR方法研究了H19的表达对膀胱癌细胞增殖和miR-675表达的影响。针对miR-675做了进一步的研究,我们分别将miR-675类似物、miR-675抑制剂和阴性对照转染到253J细胞和RT4细胞中,通过细胞增殖检测、细胞凋亡检测和细胞周期检测等实验研究miR-675对膀胱癌253J细胞和RT4细胞增殖、凋亡以及周期等细胞生物学行为的影响。最后,将miR-675类似物、miR-675抑制剂和阴性对照转染到253J细胞后,通过western blotting方法,探讨了miR-675对凋亡相关蛋白p53. Bcl-2和Bax以及周期相关蛋白cyclin D1的作用从而影响膀胱癌细胞增殖的作用机制。结果：(1)qRT-PCR结果显示,在大多数膀胱癌组织中,miR-675的表达是显著性上调的(p0.0001,差异有统计学意义),然而,在非膀胱癌患者的膀胱组织中没有看到类似的现象。同时,我们对膀胱癌患者进行了分类统计发现,膀胱癌组织中miR-675的表达与癌症分期(p0.0001)和分级(p0.0001)有关,而与年龄及性别无关。此外,在一些膀胱癌细胞系(RT4、HT-1376、5637、253 J, TCCSUP、T24和J82)中也观察到了miR-675的表达上调。(2)H19的异常表达导致miR-675的表达显著性上调,并且增加了253J细胞和RT4细胞的细胞增殖。此外,用H19-siRNA处理两种细胞使miR-675的表达水平下降,并抑制了253J细胞的细胞增殖。(3)在将miR-675类似物或抑制剂转染到253J细胞后,miR-675的表达显著性上升或下降,更重要的是,miR-675过表达增强了253J细胞和RT4细胞的细胞增殖,然而,miR-675抑制剂在细胞增殖上起着明显的抑制作用。(4)通过用miR-675类似物处理253J细胞RT4细胞时发现,处于S期的细胞明显增加,而处于G0/G1期的细胞明显减少。并且,miR-675抑制剂显著性促进了膀胱癌细胞的细胞凋亡。(5)miR-675显著性减少了p53的表达,也减少了p21的表达,此外,miR-675增强了cyclin D1的表达。miR-675类似物明显下调了Bax/Bcl-2的比率,而miR-675抑制剂明显增强了Bax/Bcl-2的比率。结论：与正常对照相比,miR-675的表达在膀胱癌组织中是显著增加的。H19正向调节miR-675的表达,并且,miR-675的过表达增加了人膀胱癌细胞的细胞增殖。我们进一步证实miR-675诱导了G1期阻滞并抑制了细胞凋亡,这可能是依靠它对p53表达的负向调节作用。总之,我们的结果表明miR-675在膀胱癌的分子病因学上起着重要的作用,并强调miR-675在膀胱癌治疗上的潜在应用价值。
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【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.14

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