miR-338-5p靶向作用于TRAF3参与肾移植术后抗体介导的免疫排斥

发布时间：2018-04-22 21:31

  本文选题：肾移植 + miR-338-5p　； 参考：《苏州大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的：本课题旨在研究miR-338-5p在肾移植患者的表达特点，及其对BAFF信号的调控作用，进而探讨其在抗体介导的肾移植排斥中的作用及意义。 方法：⑴采用共转染方法，利用双荧光素酶报告基因检测系统进行miR-338-5p的靶基因验证。⑵收集肾移植患者的血清（健康志愿者为对照），应用real-timePCR法检测患者血清中miR-338-5p的表达差异；ELISA法检测血清sBAFF的表达量；液相芯片技术检测血清中抗HLA-Ⅰ类抗体、抗HLA-Ⅱ类抗体、抗MICA抗体滴度。从而分析miR-338-5p、sBAFF、抗体间的相关性。⑶在体外试验中，采用以抗IgM抗体和/或重组人BAFF蛋白刺激的CD20+扁桃体B细胞培养体系，观察miR-338-5p激动剂/拮抗剂、及TRAF3siRNA干扰作用下，B细胞分泌IgG、IL-10的水平，来分析miR-338-5p对B细胞生物学功能的影响。采用SPSS17.0统计软件包进行分析。两个独立样本均数间的比较采用双侧t检验；配对样本均数间的比较采用配对样本t检验；相关性分析采用Spearman法及Pearson法；P0.05被认为具有统计学意义。 结果：⑴双荧光素酶报告基因检测系统验证结果表明TRAF3和NF-κB1均是miR-338-5p的靶分子，TRAF3被负向调控，，NF-κB1被正向调控；⑵与健康对照组比较，肾移植受者血清miR-338-5p水平显著下降（P0.001）、血清sBAFF水平显著增高（P0.01）。移植术后1年内者血清miR-338-5p水平显著低于移植术后1年以上者（P0.01）；移植术后3年内者血清miR-338-5p水平显著低于移植术后3年以上者（P0.01）；⑶对全部研究对象进行统计分析显示，血清miR-338-5p与sBAFF、抗HLA-Ⅱ抗体均呈显著负相关，相关系数分别为-0.51（P0.001）、-0.322（P0.05）；术后3年内者，血清miR-338-5p与抗HLA-Ⅱ抗体、抗MICA抗体均呈显著负相关，相关系数分别为-0.423（P0.05）、-0.411（P0.05）；术后3年以上者，血清miR-338-5p与抗MICA抗体、抗HLAMICA抗体均呈显著正相关，相关系数分别为0.486（P0.05）、0.578（P0.01）；⑷CD20+B淋巴细胞的体外培养试验结果显示，存在BAFF信号共同作用时，miR-338-5p经靶向作用于TRAF3增强了BAFF信号，使得B细胞分泌IgG显著增多（132±5.29ng/mlvs155±5.57ng/ml，P0.05）。 结论：miR-338-5p经靶向作用于TRAF3，间接调控BAFF信号，参与肾移植术后免疫反应过程，影响移植肾长期存活。
[Abstract]:Objective: to study the expression of miR-338-5p in renal transplantation patients and its role in regulating BAFF signal, and to explore its role and significance in antibody mediated renal allograft rejection. Methods 1: 1 was cotransfected, Double luciferase reporter gene detection system was used to detect the target gene of miR-338-5p. 2 the serum samples of renal transplantation patients were collected (healthy volunteers as control group). The expression of miR-338-5p in serum was detected by real-timePCR method and the expression of sBAFF in serum was detected by Elisa. The titers of anti-HLA- 鈪

本文编号：1789055