丹酚酸A、C配伍对HSA诱导HK-2细胞炎症因子及氧化应激反应的影响

发布时间：2018-05-02 03:25

  本文选题：丹酚酸A + 丹酚酸C　； 参考：《遵义医学院》2017年硕士论文

【摘要】：目的:研究丹酚酸A、C配伍对人血清白蛋白诱导肾小管上皮细胞过程中炎症因子及氧化应激反应的影响。方法:人肾小管上皮细胞于体外培养,随机分成5个组:正常组、人血清白蛋白组(即模型组)、药物治疗组包括丹酚酸A组、丹酚酸C组、丹酚酸A+C组(丹酚酸A和C组分按1:1加入)。无血清培养液同步化24小时后,除正常组外,其余组分别加入HSA干预24h、48h、72h,各治疗组同时加入药物治疗。ELISA检测MCP-1、CCL7、IP-10表达情况。细胞免疫荧光技术定位检测MCP-1、IP-10。Western Blot检测M-CSF。应用水溶性四唑盐法(WST-1法)检测细胞SOD活力,应用二法硫双硝基苯甲酸法(DTNB法)检测细胞GSH含量,应用硫代巴比妥酸法(TBA法)测定细胞MDA含量。结果:1.MCP-1、CCL7、IP-10的检测结果1)ELISA检测结果与相对应时间点模型组比较,24h、48h、72h三个时间点各给药组MCP-1、CCL7、IP-10的相对表达量减少(P0.01)。各给药组之间相对应时间点比较,24h、48h、72h三个时间点丹酚酸A+C组MCP-1、CCL7、IP-10的相对表达量均较丹酚酸A组、丹酚酸C组MCP-1相对表达量降低(P0.01)。2)MCP-1和IP-10阳性表达为绿色荧光,表达部位主要位于人肾小管上皮细胞的胞质。2.M-CSF检测结果与相对应时间点模型组比较,24h、48h两个时间点各给药组M-CSF相对表达量减少(P0.05),72h时间点丹酚酸C组和A+C组M-CSF相对表达量较模型组减少(P0.05)。24h、48h、72h三个时间点丹酚酸A+C组M-CSF的相对表达量均较丹酚酸A组、丹酚酸C组降低(P0.05)。3.SOD、GSH、MDA检测结果与相对应时间点正常组比较,24h、48h、72h三个时间点模型组细胞SOD活力和GSH含量相对降低(P0.05)。与相对应时间点模型组比较,24h、48h、72h三个时间点各给药组SOD活力和GSH含量增高(P0.05)。各给药组之间相对应时间点比较,24h、48h、72h三个时间点丹酚酸A+C组SOD活力和GSH含量均较丹酚酸A组、丹酚酸C组增高(P0.05)。与相对应时间点模型组比较,24h、48h、72h三个时间点各给药组MDA的含量减少(P0.05)。各给药组之间相对应时间点比较,24h、48h、72h三个时间点丹酚酸A+C组MDA的含量低于丹酚酸A组和丹酚酸C组(P0.05)。结论:丹酚酸A、C配伍对人血清白蛋白诱导的人肾小管上皮细胞MCP-1、CCL7、IP-10的表达有抑制作用。可在一定程度上提高SOD的活力和增加GSH的表达,减少MDA的表达。推测丹酚酸A、C配伍可能通过减少炎症反应,增强抗氧化作用来改善肾纤维化的进程。
[Abstract]:Aim: to study the effect of Salvianolic acid (SAFC) combination on inflammatory factors and oxidative stress in renal tubular epithelial cells induced by human serum albumin (HSA). Methods: human renal tubular epithelial cells were cultured in vitro and randomly divided into 5 groups: normal group, human serum albumin group (model group), drug treatment group including Salvianolic acid group A, Salvianolic acid C group. Salvianolic acid group A C (Salvianolic acid A and C components added at 1:1. After synchronization of serum-free medium for 24 hours, the other groups were treated with HSA for 24 h and 48 h and 72 h, respectively. The expression of MCP-1 CCL7- IP-10 was detected by drug therapy. MCP-1 IP-10.Western Blot was used to detect M-CSF. The activity of SOD was detected by water-soluble tetrazolium salt method (WST-1), the content of GSH was detected by dithiobinitrobenzoic acid method, and the content of MDA was measured by thiobarbituric acid method. Results 1. The results of 1)ELISA were compared with those of the model group at 24 h and 48 h for 72 h. The relative expression of CCL7 IP-10 in MCP-1 group was decreased by P0.01. The relative expression of MCP-1 CCL7nIP-10 in Salvianolic acid A C group was higher than that in Salvianolic acid A group, and the relative expression of MCP-1 in Salvianolic acid C group was lower than that in Salvianolic acid group. The positive expression of MCP-1 and IP-10 in Salvianolic acid group was green fluorescence. The expression site of M-CSF was mainly located in the cytoplasm of human renal tubular epithelial cells. 2. The results of M-CSF detection were compared with those of the model group at the corresponding time point. The relative expression of M-CSF was decreased at 24 h and 48 h after administration. The relative expression of M-CSF in Salvianolic acid group C and group A C was decreased at 72 h. Compared with the model group, the relative expression of M-CSF in Salvianolic acid A C group was significantly lower than that in Salvianolic acid group. Compared with the control group, the activity of SOD and the content of GSH in the model group were decreased at 24 h, 48 h and 72 h, respectively. Compared with the model group, the activity of SOD and the content of GSH were increased at 24 h, 48 h and 72 h, respectively. The activity of SOD and the content of GSH in Salvianolic acid A C group were higher than those in Salvianolic acid group at 24 h, 48 h and 72 h, respectively, while Salvianolic acid C group was higher than Salvianolic acid group (P 0.05). Compared with the model group at the corresponding time point, the content of MDA in the three time points (24 h, 48 h and 72 h) decreased (P 0.05). The content of MDA in Salvianolic acid A C group was lower than that in Salvianolic acid A group and Salvianolic acid C group at 24 h, 48 h and 72 h. Conclusion: the combination of Salvianolic acid and AFC can inhibit the expression of CCL7 IP-10 in human renal tubular epithelial cells induced by human serum albumin. It can increase the activity of SOD, increase the expression of GSH and decrease the expression of MDA to some extent. It is speculated that the combination of Salvianolic acid AFC C may improve the progression of renal fibrosis by reducing inflammatory reaction and enhancing antioxidant effect.
【学位授予单位】：遵义医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R692

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本文编号：1832179