RNA干扰p38基因对肾癌786-O细胞生物学特性的影响及对舒尼替尼的增敏作用

发布时间：2018-05-06 21:30

  本文选题：肾肿瘤 + 肾细胞癌　； 参考：《第二军医大学学报》2016年07期

【摘要】：目的探讨RNA干扰p38基因对人肾癌细胞株786-O增殖、侵袭、细胞周期和细胞对舒尼替尼敏感性的影响。方法构建针对p38的siRNA531和siRNA659两条siRNA,分别将其转染至肾癌786-O细胞株,即为siRNA531组和siRNA659组,同时设置转染无义siRNA的阴性对照组和仅加转染试剂的空白对照组。应用RT-PCR技术检测786-O细胞p38mRNA的表达,蛋白质印迹法检测p38蛋白的表达。CCK-8法检测细胞的增殖情况和对舒尼替尼的敏感性,流式细胞术检测细胞的周期改变情况,Transwell实验检测细胞的侵袭能力。结果 RT-PCR及蛋白质印迹法检测发现siRNA转染后786-O细胞p38mRNA及蛋白的表达均降低。与空白对照组和阴性对照组相比,siRNA531组和siRNA659组786-O细胞在转染后3~5d时的增殖率均降低(P0.05,P0.01),细胞对舒尼替尼的敏感性增加,两组对舒尼替尼的IC50值均低于阴性对照组[(3.2±0.3)、(1.4±0.1)μmol/mL vs(5.4±0.2)μmol/mL,P0.05]。siRNA531组、siRNA659组G1期细胞数量明显多于对照组,且两组786-O细胞出现G0/G1阻滞。转染24h后,两组的穿膜细胞数分别为56.43±6.02、34.00±8.12,与阴性对照组(76.27±5.08)相比,两组细胞的侵袭能力均下降(P0.01)。结论通过转染p38特异性siRNA可以成功沉默肾癌细胞株786-O的p38基因的表达,抑制肾癌细胞株786-O的增殖、侵袭能力,增加其对舒尼替尼的敏感性,为后续研究肾癌治疗及靶向耐药奠定基础。
[Abstract]:Objective to investigate the effects of RNA interference p38 gene on proliferation, invasion, cell cycle and cell sensitivity of human renal cell carcinoma cell line 786-O. Methods two siRNAs targeting p38 siRNA531 and siRNA659 were constructed and transfected into 786-O cell line of renal cell carcinoma, that is, siRNA531 group and siRNA659 group respectively. The negative control group transfected with nonsense siRNA and the blank control group with only transfection reagent were set up at the same time. The expression of p38mRNA in 786-O cells was detected by RT-PCR, the expression of p38 protein by Western blotting and the proliferation and sensitivity to sunitinib by CCK-8 assay. Cell cycle changes were detected by flow cytometry and the invasion ability was detected by Transwell assay. Results RT-PCR and Western blot analysis showed that the expression of p38mRNA and protein in 786-O cells decreased after siRNA transfection. Compared with the blank control group and the negative control group, the proliferation rate of 786-O cells in the siRNA531 group and the siRNA659 group decreased at 3 and 5 days after transfection, and the sensitivity of the cells to sulnitinib was increased. The IC50 value of sunitinib in both groups was significantly lower than that in negative control group [3.2 卤0.3 卤0.3 渭 mol/mL vs(5.4 卤0.2 渭 mol 路mL 路mL] .siRNA531 group had significantly higher cell number in G1 phase than that in control group, and 786-O cells were blocked by G0/G1 in both groups. 24 hours after transfection, the number of transmembrane cells in the two groups was 56.43 卤6.02 卤34.00 卤8.12, respectively, which was significantly lower than that in the negative control group (76.27 卤5.08). Conclusion transfection of p38 specific siRNA can successfully silence the expression of p38 gene in 786-O cell line, inhibit the proliferation and invasion of 786-O cell line, and increase its sensitivity to sunitinib. To lay a foundation for further study of renal cell carcinoma treatment and targeted drug resistance.
【作者单位】： 第二军医大学长征医院泌尿外科;武警河南总队医院泌尿外科;解放军458医院泌尿外科;第二军医大学长海医院泌尿外科;南京大学医学院附属金陵医院南京军区南京总医院泌尿外科;
【基金】：国家自然科学基金(81272817,81172447) 上海市自然科学基金(11ZR1447800)~~
【分类号】：R737.11

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5 胡R，

本文编号：1853969