MiR-218通过RAB6C对肾透明细胞癌调控作用的研究

发布时间：2018-05-09 12:16

  本文选题：肾细胞癌 + miR-218　； 参考：《中国人民解放军医学院》2014年博士论文

【摘要】：研究背景：肾癌是常见的泌尿系肿瘤，早期肾癌没有典型的症状和表现，临床上缺乏早期诊断预测和判断预后的标志物，而复发性及晚期转移性肾癌的治疗效果差，手术以外的放化疗等辅助治疗效果不明显。目前临床上需要一种新的生物学标志物，能够对肾脏肿瘤进行早期诊断和预后判断，并有可能作为肿瘤治疗的新靶点，提高肾癌，特别是晚期肾癌的治疗效果，延长生存期，使患者受益。 研究目的：本课题拟通过对miR-218在肾癌肿瘤中的特异表达，以及对肾癌细胞调控作用的研究，明确miR-218在肾脏肿瘤中的作用机制，为肾癌的诊治提供新的思路。 方法： 1.收集肾癌标本，利用实时定量PCR技术对新鲜肾癌组织及癌旁组织的miR-218表达量进行验证，以明确miR-218在肾癌组织的表达情况。 2.应用pcDNA3.1(+)载体，以人Has-miR-218设计引物，PCR法进行扩增，再与载体相连接，构建稳定表达质粒，并在肾癌细胞株中验证其效果。 3.使用前期合成的质粒，在体外研究中选择合适肾癌细胞株，进行转染，调控在肾癌细胞株中miR-218的表达水平，研究miR-218对肾癌细胞生物学功能的影响，如增殖、侵袭、凋亡能力的改变等情况。 4.采用生物信息学方法对靶向基因进行预测，筛选出候选靶向基因，利用设计的引物将目的基因连接入荧光报告载体，转染至肾癌细胞株内，，测定细胞裂解后的荧光表达量，并使用Western blot方法测定蛋白水平的表达变化，验证miR-218对靶向基因的调控作用，进一步明确调控的通路。 5.在动物体内验证，miR-218通过RAB6C对肾细胞癌的调控作用，以及上调miR-218的表达水平对肾癌肿瘤的抑制作用。 结果： 1．采用PCR方法对肾癌及癌旁组织标本的miR-218的表达量进行检测，发现在肾癌组织中，miR-218的表达水平较正常组织呈现明显的低表达，这提示了miR-218在肾细胞癌中可能是一种抑癌基因； 2.成功构建了miR-218表达质粒pcDNA3.1-miR-218，鉴定检测符合设计要求，该载体可以应用于miR-218功能及作用机制的研究； 3.应用miR-218表达载体，转染至肾癌细胞株中，上调细胞株中miR-218的表达水平，使用一系列标准体外肿瘤实验进行检测，发现上调miR-218的表达水平能够明显抑制肾癌肿瘤细胞的生长，减弱其增殖和侵袭能力，增强细胞的凋亡水平； 4.生物信息学预测miR-218的靶向基因之一是RAB6C，通过荧光素检测验证RAB6C确实是miR-218的靶向调控因子，Western blot结果提示，转染miR-218的肿瘤细胞中RAB6C的表达明显降低，说明miR-218通过RAB6C进行调控，抑制肿瘤细胞的增殖和侵袭，促进其凋亡； 5.动物体内实验证实，上调miR-218的表达水平，RAB6C表达水平降低，可以抑制肾癌肿瘤的生长。 结论：通过上述实验，我们首次获知，miR-218对肾癌细胞的生长、增殖、侵袭和凋亡具有调控作用，其调控作用通过调控RAB6C来实现。上调miR-218的表达，在体内体外，均可以抑制肾癌肿瘤的生长，为肾癌的肿瘤生物学治疗提供了新的途径。
[Abstract]:Background: renal cancer is a common urological tumor. Early renal cancer has no typical symptoms and manifestations. It lacks the marker of early diagnosis and prognosis, but the therapeutic effect of recurrent and advanced metastatic renal cancer is poor. The effect of adjuvant chemotherapy other than surgery is not obvious. Biomarkers can be used for early diagnosis and prognosis of renal tumor, and may be a new target for cancer treatment. It can improve the therapeutic effect of renal cancer, especially for advanced renal cancer, prolong the survival period and benefit the patients.
The purpose of this study is to provide a new idea for the diagnosis and treatment of renal cancer by the specific expression of miR-218 in renal cancer and the study of the regulatory role of miR-218 in renal cancer cells.
Method锛

本文编号：1865984