B7-H3对人精子功能影响的初步研究

发布时间：2018-05-25 03:31

  本文选题：男性不育 + 精液　； 参考：《苏州大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的：检测精液中B7-H3的含量及其与精液参数之间的关系，及其对人类精子功能的影响。 方法：实验共分三部分 1.选择83例正常有生育能力的健康男性（年龄22-37岁）和176例不育症（maleinfertiliy）患者（21-38岁），用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）检测精液中B7-H3的含量，用计算机辅助精液分析（Computer-assisted semenanalysis，CASA）检测精液参数，并分析它们的相关性。 2.用流式细胞术（flow cytometry，FCM）和荧光显微镜两种方法检测精子表面是否存在B7-H3受体及其分布情况。 3.在体外通过用不同浓度的B7-H3与精子共孵育0-4小时后，运用CASA和异硫氰酸荧光素（fluorescein isothiocyanate，FITC）标记的豌豆凝集素（Pisum sativumagglutinin，，PSA）荧光染色法检测精子活力、精子获能及精子顶体反应，观察B7-H3对人类精子功能的影响。 结果： 1.健康人和不育症患者血清B7-H3含量检测结果分别为4.53±1.12ng/ml和4.49±1.92ng/ml，两组之间差异无统计学意义(P=0.962)。但是，健康人精浆B7-H3的含量(16.67±7.71ng/ml)明显高于不育症患者的B7-H3的含量(7.79±4.27ng/ml,P0.0001)。我们进一步分析了所有标本B7-H3的含量和精液参数之间的关系。精子前向运动正常的精液标本的B7-H3的含量(11.53±6.36ng/ml)明显高于那些精子前向运动降低的精液标本(5.52±3.39ng/ml，P0.0001)。此外B7-H3的含量还和精子的曲线速率(r=0.394, P=0.011)，直线速率(r=0.542, P=0.002)，平均路径速率(r=0.498,P=0.003)成正相关关系。精子密度正常标本的B7-H3的含量(10.72±6.44ng/ml)明显高于精子密度偏低的精液标本的B7-H3的含量(6.18±4.03ng/ml，P=0.0007)。 2.为了探索精浆B7-H3是否存在调节精子功能的可能性，我们检测人类精子表面是否存在B7-H3受体。结果我们在健康人和不育症患者精子表面均检测到了B7-H3受体。并且在这几类人的精子中B7-H3受体的表达率并无显著统计学差异(P=0.976)。而受体分布主要集中在精子顶体后区，颈部，和中部。 3.将精子和不同浓度的B7-H3(0,5,10,25ng/ml)在CO2培养箱中共孵育4小时。用CASA系统在不同时间点检测前向运动精子的百分率。孵育2小时后，与10ng/mlB7-H3孵育的弱精子症患者精子活力的百分率由0小时时的精子活力(26.05±5.39%)增加到33.45±6.91%，增加有统计学意义(P=0.008)。与5ng/ml B7-H3孵育4小时后，健康人精子活力的百分率由70.35±11.71%增加到70.71±11.41%(P=0.872)，差异无统计学意义。同样，与10ng/ml B7-H3孵育4小时的弱精子症患者精子活力的百分率增加到45.76±8.72%(P=0.001)。与10ng/ml B7-H3孵育4小时的健康人的精子活力增加到75.46±8.77%，差异无统计学意义(P=0.087)。用10ng/ml B7-H3孵育的弱精子症患者的精子活力比5ng/ml B7-H3孵育的弱精子症患者的精子活力明显升高(P=0.011)，这表明B7-H3能够提高精子前向运动的百分率，并存在时间和剂量依赖关系。但是，用10ng/ml和25ng/ml B7-H3处理的弱精子症患者的精子活力变化无统计学意义(P=0.897)。此外，B7-H3对精子的获能及顶体反应无显著影响。 结论：B7-H3能够提高人类精子的活力，但对精子获能及顶体反应无影响。
[Abstract]:Objective: to detect the content of B7-H3 in semen and its relationship with semen parameters and its effect on human sperm function.
Methods: the experiment was divided into three parts
1. 83 healthy male healthy men (age 22-37 years old) and 176 cases of maleinfertiliy (21-38 years old) were selected to detect the content of B7-H3 in semen by enzyme linked immunosorbent assay (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA), and the semen parameters were detected by computer assisted semen analysis (Computer-assisted semenanalysis, CASA). Count, and analyze their correlation.
2. to detect the presence of B7-H3 receptor on sperm surface and its distribution by two methods: flow cytometry (FCM) and fluorescence microscopy.
3. after incubating with different concentrations of B7-H3 and sperm for 0-4 hours in vitro, CASA and fluorescein isothiocyanate (FITC) labeled pea lectin (Pisum sativumagglutinin, PSA) fluorescein staining was used to detect sperm motility, sperm capacitation and acrosome reaction of sperm, and the effect of B7-H3 on human sperm function was observed. Ringing.
Result锛

本文编号：1931902