热量限制通过SIRT1保护大鼠造影剂急性肾损伤

发布时间：2018-05-26 01:56

本文选题：热量限制 + 造影剂急性肾损伤　；参考：《第三军医大学》2017年硕士论文

【摘要】：研究背景:造影剂急性肾损伤(contrast induced acute kidney injury,CI-AKI)是造影的重要并发症,其发生增加了患者医疗风险。据统计,CI-AKI已成为医源性急性肾功能不全的第3大病因,增加了院内死亡率、透析率。虽然前期研究已发现一些化合物能够保护CI-AKI,但循证医学提示除水化疗法具有一定预防作用外,目前尚无明确的防治CI-AKI的手段。由于目前碘造影剂的使用不可避免,因此开发防治CI-AKI的药物具有重要的临床意义。热量限制(Calorie Restriction)是一种通过减少食物摄入总热量,但不至引起营养不良的一种饮食控制方法。自20世纪30年代以来,热量限制在延缓衰老和减轻衰老相关器官损伤中的作用不断被认识提高,其延长寿命的作用在多种生物中得到了广泛证实。随着近年来研究的深入,热量限制的作用已扩展到多种器官的保护和疾病模型。研究发现热量限制对多种肾脏疾病模型如衰老相关肾损伤、糖尿病肾病、肾脏缺血再灌注损伤、顺铂诱导肾损伤等具有保护作用。热量限制多种肾脏保护作用与沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)有关。SIRT1是一种去乙酰化酶,通过去乙酰化多种受体蛋白从而调节相关基因沉默,对细胞中多种生物学功能如凋亡、自噬、代谢等发挥调控作用。由于造影剂随循环血入肾后造成髓质缺血缺氧、氧化应激对肾小管上皮细胞的损伤是造影剂急性肾损伤发病机制的中心环节,而前期研究发现热量限制能够在肾脏发挥抗氧化应激、抗凋亡作用,因此我们推测热量限制能够保护CI-AKI,并且这种保护作用很可能与上调肾脏SIRT1表达有关,因此设计了本课题。本研究以CI-AKI大鼠为研究对象,观察热量限制对大鼠CI-AKI的作用,并深入探讨其机制。研究目的:观察热量限制对大鼠CI-AKI的作用并探讨其机制。研究方法:清洁级SD大鼠,10到12周龄,雌雄各半,体质量230±15g,分做两组,一组自由进食(AL组),一组大鼠给予正常日进食量60%喂养(CR组),两组均自由进水,饲养4周。4周后两组大鼠根据给药不同再分为7组:对照组(Vehicle组)、单纯热量限制组(CR组)、CI-AKI模型组(CM组)、热量限制+CI-AKI模型组(CR+CM组)、抑制剂+热量限制+CI-AKI模型组(EX527+CR+CM组)、白藜芦醇+CI-AKI模型组(RES+CM组)、抑制剂+白藜芦醇+CI-AKI模型组(EX527+RES+CM组),每组5只。分离颈外静脉后将PE-10塑料管插入。通过置管注射吲哚美辛(10 mg/kg)。15min后注入L-NAME,剂量10mg/kg。再次间隔15min注入碘普罗胺,剂量1.8g(I)/kg,以此制作CI-AKI大鼠模型。EX527(10 mg/kg)、白藜芦醇(25 mg/kg)间隔30min,在造模前经腹腔注射给予。药物注射完成后拔除大鼠颈外静脉置管,缝合皮肤,待大鼠苏醒后放回动物房代谢笼饲养24h,允许大鼠自由进食水,收集尿液。24h后重新麻醉大鼠,取血和肾脏。测定测定Scr、BUN、Ucr,计算CCr。肾脏进行HE染色,观察病理改变,对肾小管损伤情况进行评定。提取肾脏组织蛋白,检测MDA、SOD、MPO、IL-1β水平,TUNEL染色观察肾组织凋亡情况并计数凋亡细胞数目,免疫荧光染色观察肾脏组织SIRT1蛋白表达变化。Western blot检测各组大鼠肾组织Cleaved Caspase-3、Total Caspase-3、SIRT1蛋白表达变化。结果:1.热量限制预处理能够改善CI-AKI大鼠肾功能,降低Scr、BUN水平,增加CCr,减轻肾脏病理损伤。2.热量限制预处理能够减少CI-AKI大鼠肾脏细胞凋亡,降低氧化应激和炎症反应水平。3.CI-AKI大鼠肾脏SIRT1蛋白表达下降,而热量限制预处理能够改善这种下降趋势。4.SIRT1特异性抑制剂EX527能够部分阻断热量限制对CI-AKI的保护作用,而白藜芦醇能够模拟这种保护作用。结论:热量限制能够通过抗凋亡、抗氧化应激、抗炎作用保护大鼠CI-AKI,这种保护作用与上调大鼠肾脏SIRT1蛋白表达有关。SIRT1激动剂白藜芦醇能够模拟热量限制的这种保护作用。
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【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R692.5

【参考文献】