GLP-1对高糖及波动性高糖诱导的人肾小球系膜细胞内质网应激及凋亡的影响

发布时间：2018-06-03 19:55

本文选题：胰高血糖素样肽-1 + 人肾小球系膜细胞　；参考：《天津医科大学》2017年硕士论文

【摘要】：目的:胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是一种治疗2型糖尿病的新型药物,在平稳降糖的同时还可以保护靶器官功能,比如可以通过抑制炎症反应及氧化应激等实现对肾脏的保护作用,延缓糖尿病肾病(DN)的发生发展。有研究发现,GLP-1可以降低肝细胞、心肌细胞、胰腺细胞等细胞的凋亡,因此我们推测,GLP-1也可以降低肾脏细胞的凋亡从而实现肾脏保护作用。本研究以人肾小球系膜细胞(HRMC)为研究对象,观察在高糖及波动性高糖培养条件下,加入GLP-1前后细胞形态、增殖活性及凋亡率的变化,同时从内质网应激角度初步探讨GLP-1降低细胞凋亡的机制。方法:1.体外培养人肾小球系膜细胞(HRMC),通过倒置显微镜观察细胞形态学;2.以单纯高糖培养基(30mmol/L)干预细胞不同时间(0、3h、6h、12h、24h、48h)后,分别用荧光定量PCR法和Western blotting法检测GRP78表达量的变化;3.以高糖培养基(30mmol/L)+GLP-1(100nmol/L)共同干预HRMC不同时间(0、3h、6h、12h、24h、48h)后,分别用荧光定量PCR法和Western blotting法检测GRP78表达量的变化,并与单纯高糖干预进行对比;4.将HRMC分为6组:正常葡萄糖对照组(CON组,5.6mmol/L葡萄糖培养);持续性高糖组(HG组,30mmol/L葡萄糖培养);波动性高糖组(HNF组,30mmol/L葡萄糖培养3h,之后弃旧培养液,换用5.6mmol/L葡萄糖培养2h,一天反复3次,最后于5.6mmol/L葡萄糖培养基中过夜);正常葡萄糖+100nmol/L GLP-1组(CON+G组);持续性高糖+100nmol/L GLP-1组(HG+G组);波动性高糖组+100nmol/L GLP-1组(HNF+G组)。各组细胞干预24h后,(1)用MTT法检测HRMC细胞活性;(2)Annexin V-FITC/PI染色后,用流式细胞仪测定细胞凋亡率;(3)分别用荧光定量PCR法和Western blotting法检测各组GRP78表达水平。结果:1.倒置显微镜下观察,HNF组细胞数量明显减少,细胞形态明显改变,而加入GLP-1共孵育后,细胞数量及形态均明显改善。2.MTT结果:HG组较CON组可显著增加细胞活性(P0.05),加入GLP-1共孵育后细胞活性可明显下降(P0.05)。HNF组与CON组和HG组相比细胞活性明显较低(P0.05),加入GLP-1共孵育后细胞活性可明显增加(P0.05),但细胞活性仍明显低于HG+G组。3.流式检测细胞凋亡率结果:HG组和HNF组细胞凋亡率较CON组明显升高(P0.05),而加入GLP-1共同干预后细胞凋亡率均明显下降(P0.05);HNF组与HG组相比细胞凋亡率明显升高(P0.05),HNF+G组较HG+G组凋亡率也是明显升高的(P0.05)。4.不同干预时间条件下,单纯高糖处理细胞3h时GRP78表达水平明显升高(P0.05),到6h时表达水平达到高峰(P0.05),12h后GRP78表达量开始下降,但与0h相比仍较高(P0.05),24h、48h后表达量进一步下降,与0h相比差异无统计学差异(P0.05)。加入GLP-1共孵育与单纯高糖干预相比,可显著增加24h及48h时GRP78的表达量(P0.05),其余时间点二者比较无明显变化(P0.05)。5.不同葡萄糖培养条件干预细胞24h,HG组GRP78表达水平与CON组相比,表达量相当(P0.05),HNF组表达量较CON组和HG组明显降低(P0.05);HG+G组GRP78表达量较HG组明显升高(P0.05);HNF+G组表达量较较HNF组也明显升高(P0.05),但仍明显低于HG+G组(P0.05)。结论:1.一定程度的高糖刺激可以促进肾小球系膜细胞的增殖活性,可能参与糖尿病肾病的发生发展,而GLP-1可以降低这一作用,其具体机制还有待进一步研究。2.持续高糖干预肾小球系膜细胞,早期可以通过上调GRP78表达对抗内质网应激,随着应激持续时间的延长,GRP78表达逐渐下降,难以对抗内质网应激而发生细胞凋亡。3.波动性高糖与持续高糖相比,对肾小球系膜细胞的应激及损害更严重,前者引起的细胞凋亡率更高、GRP78表达水平更低。4.GLP-1可以改善高糖及波动性高糖引起的肾小球系膜细胞凋亡,其机制可能是通过上调GRP78表达水平从而降低内质网应激引起的细胞损害,延缓糖尿病肾病的发生及发展,对肾脏起到保护作用。
[Abstract]:Objective : Glucagon - like peptide - 1 ( GLP - 1 ) was a new drug for the treatment of type 2 diabetes mellitus . The expression of GRP78 in HG + G group was significantly higher than that in CON group ( P0.05 ) . The expression level of GRP78 in HG + G group was significantly higher than that in group ( P0.05 ) .
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R587.2;R692.9

【参考文献】