MicroRNA-122在肾透明细胞癌组织中的表达及在肾透明细胞癌侵袭转移中分子调控机制的研究

发布时间：2018-06-14 07:02

  本文选题：miR-122 + 肾透明细胞癌　； 参考：《吉林大学》2014年博士论文

【摘要】：肾细胞癌(renal cell carcinoma, RCC)是起源于肾实质泌尿小管上皮细胞的恶性肿瘤，简称肾癌；70％为肾透明细胞癌(Renal clear cell carcinoma, RCCC)。在我国肾癌发病率呈逐年增多的趋势。由于肾细胞癌的发病机制不完全清楚，治疗手段仍以手术为主。50%的患者首次就诊时已经属于晚期肾细胞癌丧失手术时机，因此探索新的生物治疗方法已经成为临床上迫切需要解决的实际问题。 MicroRNAs (miRNAs)是一类重要的非编码的小RNA，长度在19到25个核苷酸，可与目标mRNA在3’非编码区(untranslated regions, UTR)发生连接，从而引起mRNA的降解或抑制其翻译。越来越多的证据表明，许多肿瘤的发生、发展与miRNAs的异常表达密切相关，其可作为癌基因或抑癌基因在肿瘤中发挥作用。近年来研究发现miR-122在肾癌组织中的表达上升，提示肾癌组织中miR-122被激活。但是目前miR-122在肾透明细胞癌组织中的功能和表达的研究很少，与肾透明细胞癌增殖、侵袭和转移的具体关系迄今尚不清楚。 方法： 本研究应用实时定量PCR方法检测miR-122在肾透明细胞癌及癌旁非肿瘤组织中表达情况，研究其与临床分期、病理分级之间的关系。同时检测各肾透明细胞癌细胞株中miR-122的表达情况，筛选合适的体外肾透明癌细胞模型，研究其对肾透明癌细胞的生物学性状的影响，如细胞增殖能力、集落形成能力和侵袭转移能力等。继之用生物信息学方法预测miR-122可能的靶基因，并进行初步研究来探讨其对肾透明癌细胞侵袭和转移中可能的分子机制，为肾透明细胞癌的早期诊断和治疗提供新的思路。 结果： 实时定量PCR结果发现，肾透明细胞癌组织中的miR-122的相对表达量为(4.04±2.23)，与癌旁非肿瘤组织比较有显著差异(P 0.05)。根据病理分级进行分组，高分化组的miR-122相对表达量为(3.24±1.32)，中低分化组相对表达量为(5.05±2.76)，两者没有显著差异(P0.05)。在不同临床分期组合样本中，I期肾透明细胞癌中miR-122的相对含量为(3.49±1.49)，II~III期肾透明细胞癌中的相对含量为(5.69±3.35)，没有显著统计学差异(P0.05)。实时定量PCR 结果显示： 肾透明癌细胞株Caki-2细胞中miR-122的表达水平最高，而A498和786-O细胞中miR-122的表达水平相对其他细胞较低，因此A498和786-O用于后续实验。不同浓度miR-122或阴性对照miR-Con转染72h后，有效地促进A498和786-O细胞的增殖。生长曲线结果显示：与miR-Con比较，miR-122促进A498和786-O细胞增殖，并呈时间依赖性。而anti-miR-122转染可抑制A498和786-O细胞增殖。集落形成能力结果显示：，转染miR-122的A498和786-O细胞集落形成个数分别为160.67±7.37个和176.67±8.50个，明显高于阴性对照组(127.33±3.21个和141.67±5.03个)。转染anti-miR-122组A498和786-O细胞集落形成个数分别为93.67±5.69个和104.67±4.73个,明显低于anti-miR-Con组细胞集落形成个数为(128.67±4.73和142.00±3.00)。Transwell小室侵袭实验表明，在A498和786-O细胞，转染阴性对照miR-Con组穿过Matrigel胶侵袭的细胞数分别为157.67±9.50个和108.00±4.58个，而转染miR-122组细胞组穿过Matrigel胶侵袭的细胞数分别为203.33±13.80个和137.33±5.03个，明显高于阴性对照组（P 0.01）。Transwell小室转移实验表明，在A498和786-O细胞，转染阴性对照miR-Con组穿过Collagen IV转移的细胞数分别为183.00±5.29个和146.67±6.03个，，而转染miR-122组细胞组穿过Collagen IV转移的细胞数分别为242.00±11.53个和185.00±6.56个，明显高于阴性对照组（P 0.01）。生物软件预测miR-122潜在的靶基因有200多个，Western blot结果证实，与miR-Con转染组细胞比较，miR-122转染组A498和786-O细胞中p-Akt、p-mTOR、p-p70S6K和p-4E-BP1表达明显增加。 结论： (1)肾透明细胞癌组织中miR-122的相对表达水平较癌旁非肿瘤组织明显上调，提示miR-122的表达上调可能与肾透明细胞癌的发病机制相关。miR-122的表达水平与肾透明细胞癌的病理分级及临床分期组合无显著相关性。 (2)肾透明癌A498和786-O细胞中miR-122的表达水平较其他细胞ACHN、Caki-1、Caki-2较低，用于后续研究。 (3)过表达miR-122促进A498和786-O细胞增殖和集落形成能力，而Anti-miR-122转染后抑制A498和786-O细胞增殖和集落形成能力。 (4).过表达miR-122促进A498和786-O细胞侵袭转移能力。 (5) Akt/mTOR信号通路是miR-122潜在的靶基因。
[Abstract]:Renal cell carcinoma (RCC) is a malignant tumor originating in the renal tubule epithelial cells, referred to as renal cell carcinoma, and 70% is clear cell carcinoma of the kidney (Renal clear cell carcinoma, RCCC). The incidence of renal cancer in China is increasing year by year. The first.50% patients are the first time to lose the operation of advanced renal cell carcinoma, so exploring new biological treatments has become an urgent problem to be solved in the clinic.
MicroRNAs (miRNAs) is an important class of important non coding small RNA, with a length of 19 to 25 nucleotides, which can be linked with the target mRNA in the 3 'non coding region (untranslated regions, UTR), causing the degradation of mRNA or inhibiting its translation. More and more evidence suggests that many tumors are occurring, and their development is closely related to the abnormal expression of miRNAs, It can be used as oncogene or tumor suppressor gene in tumor. In recent years, it has been found that the expression of miR-122 in renal carcinoma tissue is rising, suggesting that miR-122 is activated in renal cell carcinoma. But there are few studies on the function and expression of miR-122 in the tissue of renal clear cell carcinoma, and the specific relationship with the proliferation, invasion and metastasis of renal cell carcinoma. It's not yet clear.
Method锛

本文编号：2016573