CatSper3、SEPT7与特发性弱精子症关系的研究

发布时间：2018-06-18 09:43

  本文选题：CatSper3 + SEPT7　； 参考：《郑州大学》2017年硕士论文

【摘要】：精子是大自然创造的神奇的细胞,它唯一的功能就是获得动能,寻找到卵细胞,并且与卵细胞结合,形成受精卵。像其它很多特殊和复杂的人类器官和细胞一样,精子也含有许多特殊的成分和元件来完成自身的生物合成。通常来说,人类,小鼠等等哺乳动物储存的精子处于沉默状态,通过射精使精子进入生殖道,喷射出的精子在生殖道强制成熟,获得动能,称为“精子获能”,进而完成最终受精过程,形成受精卵。近年来,随着男性科学研究的不断深入和发展,精液形态和功能检查越来越普及,同时,精液质量和功能也成为人们越来越关注的问题。男性不育与男性精液质量密切相关,任何因素导致的男性精液质量都可能引起男性不育,其中精子活力低下就是引起男性精液质量下降的一个因素。精子活力低下称为弱精子症(asthenozoospermia AZS)。世界卫生组织(World Health Organization,WHO)在2010年给出标准,将精子运动能力分为三个等级:精子的前向运动(Progressive Motility PR),指精子的快速或者缓慢的前向运动;精子的非前向运动(Non-Progressive Motility NP),指精子的原地运动;精子不活动(Immotility IM)。正常精液的精子前向运动率(PR)≥32%,精子密度(Sperm Density)≥15×106/m L。精液中的精子前向运动率(PR)32%,精子密度≥15×106/m L就称为弱精子症。弱精子症成因复杂,导致弱精子症的原因有很多,如染色体异常、感染、精液液化不良、精索静脉曲张等,原因不明的弱精子症称为特发性弱精子症(Idiopathic Asthenozoospermia)。弱精子症引起的男性不育成为男性科学中重要的课题之一,研究弱精子症的发病机制和寻求治疗途径成为无法规避的难题。目前与弱精子相关的因子家族有很多,研究这些因子的蛋白分子通路和这些因子在弱精子症的发生发展中的作用有利于揭示弱精子的病因,并为临床提供治疗依据。本实验利用逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-PCR,RT-PCR)和蛋白免疫印迹实验(Western Blot)分别检测正常精子和弱精子症中CatSper3、SEPT7的表达,证明CatSper3、SEPT7的表达与弱精子症的联系,为弱精子症的研究提供更多的依据。材料与方法1研究对象标本收集:弱精子症标本来自于2015年9月~12月期间郑州大学第三附属医院男科门诊的病人,正常对照组是各项检查合格者的精液标本,来自于郑州大学第三附属医院河南省人类精子库的供精者。两组精液间的年龄、精液量、PH、液化时间等各项精液指标均无统计学差异。受试者禁欲2~7天,手淫法收集精液至无菌杯中,37℃孵育,60min内液化完全。两组各采集30例标本。正常对照组浓度≥60×106/m L,PR≥32%,弱精子组浓度≥60×106/m L,PR32%。2方法2.1 RT-PCR弱精子症和正常男性精子(对照组)中CatSper3和SEPT7 mRNA的表达采用RT-PCR进行检测。2.2 Western Blot弱精子症和正常男性精子(对照组)中CatSper3和SEPT7蛋白的表达采用Western Blot蛋白免疫印迹法进行检测。3统计学分析数据统计分析采用SPSS 22.0软件。结果中计量的资料数据以(?)±s表示,对正常对照组和弱精子组精液基本参数、mRNA和蛋白表达采用两独立样本t检验进行分析,精子前向运动能力与CatSper3和SEPT7表达的相关性采用Pearson相关系数(r)进行描述。α=0.05为检验水准。结果1两组精子中CatSper3 mRNA的表达正常对照组和弱精子症组中CatSper3 mRNA相对表达量分别为:1.04±0.33、0.55±0.17,与正常对照组相比,特发性弱精子症患者精子中CatSper3 mRNA的表达显著降低(t=7.321,P0.01)。2两组精子中的CatSper3蛋白表达正常对照组和弱精子症组中CatSper3蛋白的相对表达量分别为:0.81±0.08、0.41±0.11,与正常对照组相比,特发性弱精子症患者精子中CatSper3蛋白的表达显著降低(t=15.298,P0.01)。3两组精子中SEPT7 mRNA的表达正常对照组和弱精子症组中SEPT7 mRNA的相对表达量分别为:0.81±0.08、0.52±0.06,与正常对照组相比,特发性弱精子症组精子中SEPT7 mRNA的表达显著降低(t=14.930,P0.01)。4两组精子中SEPT7蛋白的表达正常对照组和弱精子症组中SEPT7蛋白的相对表达量分别为:0.79±0.09、0.47±0.11,与正常对照组相比,特发性弱精子症组精子中SEPT7蛋白的表达显著降低(t=11.840,P0.01)。5 CatSper3、SEPT7在精子中表达水平与精子前向运动的相关性精子前向运动能力与CatSper3 mRNA和蛋白表达水平(r=0.620,P0.01;r=0.830,P0.01)、SEPT7 mRNA和蛋白表达水平(r=0.806,P0.05;r=0.776,P0.05)分别具有相关性。结论CatSper3作为精子钙离子通道蛋白的家族成员之一,在精子中表达下降可能引起钙离子通道失衡,精子无法获能,导致精子活力下降。SEPT7作为Septin家族成员之一,是精子环的重要组成部分,在精子中表达下降可能导致精子结构缺失使精子活力低下。
[Abstract]:Sperm is a magic cell created by nature . The only function is to get kinetic energy , to find eggs , and to combine with egg cells to form fertilized eggs . In recent years , sperm motility , like many other special and complex human organs and cells , is becoming more and more popular . In recent years , sperm motility is a factor leading to a decline in semen quality . In recent years , sperm motility is called asthenospermia . The sperm motility rate ( PR ) of normal semen is 鈮，

本文编号：2035040