hnRNPA2B1基因沉默对786-0肾癌细胞生长的影响及其机制研究

发布时间：2018-07-08 12:01

  本文选题：核不均一核糖核蛋白A2B1 + 基因沉默　； 参考：《重庆医科大学》2014年硕士论文

【摘要】：目的：探讨核不均一核糖核蛋白A2B1（hnRNPA2B1）在786-0肾癌细胞生长中的作用，及其调节肾癌细胞生长的可能机制。 方法：构建针对hnRNPA2B1基因转录序列的短发夹RNA（shRNA）重组质粒，转染786-0细胞，G418筛选转染重组质粒（包括空质粒）的单克隆细胞株。qRT-PCR检测重组质粒对hnRNPA2B1基因的沉默效果，建立hnRNPA2B1基因特异性低表达的786-0肾癌细胞模型。按照处理因素将癌细胞分成P-shRNA-A2B1组（基因沉默组，转染重组质粒）、P-shRNA-GFP组（空质粒对照组，转染空质粒）、正常786-0组（正常对照组，，未转染质粒）；MTT比色法检测各组细胞的增殖能力；流式细胞术(FCM)检测各组细胞凋亡率；qRT-PCR检测各组细胞中凋亡因子Bcl-X亚型Bcl-X（S）与Bcl-X（L）表达改变以及Bcl-X（S）/Bcl-X（L）比值变化。 结果：1、P-shRNA-A2B1组hnRNPA2B1基因表达量较正常786-0组明显降低（P0.05），P-shRNA-GFP组hnRNPA2B1基因表达量与正常786-0组无明显差异(P0.05),成功建立了hnRNPA2B1基因低表达的786-0肾癌细胞株模型；2、与正常786-0组相比，P-shRNA-A2B1组细胞增殖率降低（P0.05），凋亡率增加（P0.05），而P-shRNA-GFP组与正常786-0组相比均无明显差异(P0.05)；3、P-shRNA-A2B1组促凋亡因子Bcl-X（S）亚型mRNA表达量以及Bcl-X（S）/Bcl-X（L）比值明显高于正常786-0对照组（P0.05），P-shRNA-GFP组与正常786-0差异无统计学意义（P0.05)。 结论：hnRNPA2B1基因在786-0肾癌细胞中表达，沉默该基因可以抑制786-0肾癌细胞的增殖，促进癌细胞凋亡，最终抑制癌细胞生长。hnRNPA2B1基因促进肾癌细胞生长的作用与调节凋亡相关因子Bcl-X两个亚型Bcl-X（S）与Bcl-X（L）的表达有关。
[Abstract]:Aim: to investigate the role of nuclear heterogeneous ribonucleoprotein A2B1 (hnRNPA2B1) in the growth of 786-0 renal cancer cells and its possible mechanism. Methods: the short hairpin RNA (shRNA) recombinant plasmid targeting the transcription sequence of hnRNPA2B1 gene was constructed and transfected into 786-0 cell line G418. The silencing effect of the recombinant plasmid to hnRNPA2B1 gene was detected by qRT-PCR. To establish a 786-0 renal cancer cell model with a specific low expression of hnRNPA2B1 gene. The cancer cells were divided into P-shRNA-A2B1 group (gene silencing group, transfected recombinant plasmid) and P-shRNA-GFP group (empty plasmid control group, transfected empty plasmid) according to the treatment factors. MTT colorimetric assay was used to detect the proliferation ability of normal 786-0 group (normal control group, untransfected plasmid). Apoptosis rate was detected by flow cytometry (FCM) and the expression of Bcl-X (S) and Bcl-X (L) and the ratio of Bcl-X (S) / Bcl-X (L) were detected by qRT-PCR. Results the expression of hnRNPA2B1 gene in group 1: 1 P-shRNA-A2B1 was significantly lower than that in group 786-0 (P0.05). The expression of hnRNPA2B1 gene in P-shRNA-GFP group was not significantly different from that in group 786-0 (P0.05). The model of 786-0 renal cell carcinoma cell line with low expression of hnRNPA2B1 gene was successfully established. 2Compared with the normal 786-0 group, the proliferation rate and apoptosis rate of P-shRNA-A2B1 group decreased (P0.05), but the P-shRNA-GFP group had no significant difference compared with the normal 786-0 group (P0.05). 3The expression of Bcl-X (S) subtype mRNA and the ratio of Bcl-X (S) / Bcl-X (L) in P-shRNA-A2B1 group were significantly higher than those in normal 786-0 control group (P0.05). There was no significant difference between P-shRNA-GFP group and normal 786-0 group (P0.05). Conclusion the gene of RNPA2B1 is expressed in 786-0 renal cell carcinoma cells. Silencing the gene can inhibit the proliferation of 786-0 renal cancer cells and promote the apoptosis of renal cancer cells. The inhibitory effect of hnRNPA2B1 gene on the growth of renal cancer cells was related to the regulation of the expression of apoptosis-related factor Bcl-X (S) and Bcl-X (L).
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.11

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本文编号：2107364