纳米聚合物mPEG-PEI介导EZH2-shRNA转染前列腺癌的实验研究

发布时间：2018-07-26 17:52

【摘要】：小干扰RNA基因治疗去势前列腺癌具有良好的前景,阳离子聚合物纳米材料作为一种新型的肿瘤基因治疗载体,为其应用于临床带来了希望。在本研究中,我们合成一个新型的纳米聚合物聚乙二醇化的聚乙烯亚胺(mPEG-PEI),作为一个有效的非病毒基因载体,发现此共聚物能够成功转染EZH2-shRNA基因至前列腺癌PC3细胞株,并在细胞中稳定表达。前期的研究证明IEZH2 (Enhancer of zeste homolog 2)与去势前列腺癌的形成、发展密切相关。转入EZH2-shRNA基因降低癌细胞中EZH2mRNA蛋白表达可能有效治疗难治性去势前列腺癌CRPC (Castration Resistant Prostate Cancer)。mPEG-PEI/质粒DNA复合物显示着低细胞毒性和较高的基因转染效率。mPEG-PEI作为一个很具前景的的非病毒基因载体,能够成功转染EZH2-shRNA至目的前列腺癌细胞PC3,这为晚期前列腺癌的治疗带来新的希望。方法：1.聚乙二醇化的聚乙烯亚胺(mPEG-PEI)纳米凝胶的合成及表征。2.测定PEG-PEI/质粒DNA复合物的粒径和电荷；琼脂糖凝胶电泳阻滞实验测定复合物结合能力；细胞毒性实验以及红细胞聚集实验测定mPEG-PEI的细胞毒性及转染效率,细胞转染实验选择最佳转染效率时的N/P(聚合物上的氮原子比DNA上的磷原子)比,研究聚乙二醇化的聚乙烯亚胺(mPEG-PEI)作为基因载体的性质。3.体外转染EZH2-shRNA基因至前列腺癌细胞PC3细胞并获得稳定表达,然后用RT-PCR、Westen blot方法证实EZH2-mRNA蛋白的表达情况,用以检测转染EZH2-shRNA基因后的基因抑制效应。结果：1.成功合成和表征共聚物mPEG-PEI。2.随着N/P比增大1mPEG-PEI与DNA结合更牢固,N/P=10,复合物能够完全结合。3.在不同的聚合物浓度及不同的N/P比值复合物的细胞毒性不同。随着mPEG-PEI/pDNA复合物浓度的增高,PC3细胞的死亡率增大。当浓度大于50，

本文编号：2146823