VDR和GLi1在前列腺癌细胞PC-3中的表达及其相关性

发布时间：2018-09-17 13:35

【摘要】：目的初步探讨慢病毒携带sh RNA-VDR载体干扰前列腺癌PC-3细胞中VDR基因对GLi1的影响。方法依照PC-3细胞的培养条件培养细胞;采用荧光定量PCR法和免疫细胞化学SP法检测PC-3细胞中VDR、GLi1两个基因表达情况;对PC-3细胞病毒侵染进行效率评价;运用RT-PCR法检测PC-3细胞VDR基因干扰效果及Gli1转录水平改变情况。结果细胞培养:拍照记录细胞状态:PC-3细胞生长状态良好,以4 d为1周期进行传代;荧光定量PCR法和免疫细胞化学SP法显示VDR、GLi1均在PC-3细胞中表达;慢病毒侵染效率显示为按照1∶10的比例向PC-3细胞加入LV3-NC慢病毒时,细胞侵染效率最好,约为95%左右;RT-PCR显示:VDR-sh RNA慢病毒成功干扰VDR表达,在VDR-sh RNA慢病毒转染72 h后与对照组相比实验组VDR基因转录水平下降85%(P0.05),同时实验组GLi1基因转录水平与对照组相比上升9%(P0.05);而当转染96 h后实验组VDR基因转录水平与对照组相比下降99%(沉默),同时实验组GLi1基因转录水平与对照组相比上升248%(P0.05)。结论所培养的PC-3细胞状态较好;VDR和GLi1基因在PC-3细胞中均表达;慢病毒按照1∶10的比例侵染PC-3效率最高;当VDR被干扰后GLi1表达增高,因而在前列腺癌细胞中维生素D可抑制Hh信号通路可致GLi1表达下调。
[Abstract]:Objective to investigate the effect of lentivirus carrying sh RNA-VDR vector on VDR gene in prostate cancer PC-3 cells. Methods the expression of VDR,GLi1 gene in PC-3 cells was detected by fluorescence quantitative PCR assay and immunocytochemical SP assay according to the culture conditions of PC-3 cells, and the efficiency of viral infection of PC-3 cells was evaluated. The interference effect of VDR gene and the changes of Gli1 transcription level in PC-3 cells were detected by RT-PCR assay. Results Cell culture showed that the cell was in a good growth state and was subcultured in 4 days for 1 cycle, and VDR,GLi1 was expressed in PC-3 cells by fluorescence quantitative PCR assay and immunocytochemical SP method. The infection efficiency of lentivirus was as follows: when LV3-NC lentivirus was added to PC-3 cells at 1:10, the infection efficiency was the best, and about 95% RT-PCR showed that the lentivirus of 10% VDR-sh RNA successfully interfered with the expression of VDR. After 72 h of VDR-sh RNA lentivirus transfection, the VDR gene transcription level in the experimental group decreased by 85% (P0.05), while the GLi1 gene transcription level in the experimental group increased by 9% (P0.05) compared with the control group, while the VDR gene transcription level in the experimental group was significantly higher than that in the control group after 96 h transfection (P0.05). Compared with the control group, the transcription level of GLi1 gene in the experimental group increased by 24.8% (P0.05). Conclusion both VDR and GLi1 genes were expressed in PC-3 cells in good condition, lentivirus infection of PC-3 at 1:10 was the most efficient, and GLi1 expression was increased when VDR was interfered. Vitamin D could inhibit Hh signaling pathway and induce down-regulation of GLi1 expression in prostate cancer cells.
【作者单位】： 昆明医科大学第一附属医院泌尿外科;
【基金】：云南省应用基础研究(昆医联合专项基金)(编号:2017FE467-042;2014FB013)
【分类号】：R737.25

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