中介素对大鼠肾小球内皮细胞缺氧损伤的保护作用

发布时间：2018-10-09 18:38

【摘要】：目的:探究中介素(Intermedin,IMD)对大鼠肾小球内皮细胞(rRGEC)缺氧损伤的影响及其可能的机制。方法:(1)实验分组:将rRGEC传代培养,选取生长状态良好的细胞,随机分成正常组(N组),缺氧组(H组)及IMD组,N组置于二氧化碳培养箱内(5%CO2、37℃)培养,H组与IMD组置于三气培养箱内(90%N2、5%CO2、5%O2、37℃)缺氧培养,按培养液中IMD的最终浓度将IMD组分为10-8mol/L(IMD1组)、10-7mol/L(IMD2组)、10-6mol/L(IMD3组)。6h后留取各组细胞及其培养液用于检测。(2)相差显微镜下观察细胞形态学特点。(3)流式细胞术分析细胞凋亡率。(4)Elisa法检测细胞上清液中4-羟壬烯醛(4-HNE)、活性氧(ROS)及超氧化物歧化酶(SOD)含量。(5)tanswell聚碳酸酯膜小室内制备内皮细胞单层,并测其底室与顶室FITC-BSA荧光强度,以底室与顶室荧光强度比值的变化来表示细胞通透性变化。(6)实时定量PCR检测各组细胞缺氧诱导因子1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)mRNA的相对表达量。(7)免疫细胞化学法检测细胞HIF-1α及VEGF蛋白的表达并进行半定量分析。结果:(1)细胞形态学改变:相差显微镜下,N组细胞生长状态良好,无悬浮死亡细胞;H组细胞肿胀、悬浮死亡细胞较多;与H组相比,IMD1、IMD2、IMD3组细胞损害均减轻,悬浮死亡细胞较少,与N组接近。(2)细胞凋亡率的变化:与N组相比,IMD1、IMD2、IMD3组细胞凋亡率降低(P0.05);与H组相比,IMD1、IMD2、IMD3组细胞凋亡率均降低(P0.05)。(3)培养液上清中4-HNE、ROS、SOD的含量:与N组相比,H组细胞培养液上清中4-HNE、ROS升高,SOD降低(P0.05);与H组相比,IMD1、IMD2、IMD3组细胞培养液上清中4-HNE、ROS降低,SOD升高(P0.05)。(4)细胞通透性的改变:与N组相比,H组transwell聚碳酸酯膜小室的底室与顶室FITC-BSA荧光强度比值增加,细胞通透性增加(P0.05);与H组相比,IMD1、IMD2、IMD3组transwell聚碳酸酯膜小室的底室与顶室FITC-BSA荧光强度比值降低,细胞通透性降低(P0.05)。(5)HIF-1αmRNA及蛋白的相对表达量:与N组相比,H组HIF-1αmRNA及蛋白相对表达量增高(P0.05);与H组相比,IMD2组HIF-1αmRNA及蛋白相对表达量增高(P0.05)。(6)VEGFmRNA及蛋白的相对表达量:与N组相比,H组VEGFmRNA及蛋白相对表达量增高(P0.05);与H组相比,IMD2组VEGFmRNA及蛋白相对表达量增高(P0.05)。(7)相关分析发现HIF-1αmRNA、VEGFmRNA相对表达量与细胞凋亡率呈较强负相关(r1=-0.919,r2=-0.911,P0.05)。结论:中介素可使缺氧损伤的细胞形态改善且细胞通透性降低,脂质过氧化物产生减少,细胞凋亡减轻,因此减轻了缺氧损伤,进而保护了肾小球内皮细胞,与其上调HIF-1α与VEGF生成有关。
[Abstract]:Aim: to investigate the effect of Intermedin,IMD on (rRGEC) hypoxia injury in rat glomerular endothelial cells and its possible mechanism. Methods: (1) Experimental group: rRGEC was subcultured, and the cells in good growth state were selected. They were randomly divided into normal group (N group), hypoxia group (H group) and IMD group (N group) cultured in carbon dioxide incubator (5CO2 + 37 鈩，

本文编号：2260368