前列腺癌中Vasohibin-1的表达特点及其生物学作用初步研究

发布时间：2018-12-11 13:44

【摘要】：目的:探索前列腺癌组织中血管抑制蛋白-1(vasohibin-1,VASH-1)的表达特性,以及其表达与相关血管活性因子CD34、血管内皮生长因子-A(vascular endothelial growth factor-A,VEGF-A)及缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α,HIF-1α)表达的相关性,初步了解VASH-1对血管生成的影响。研究VASH-1及VEGF-A、HIF-1α分别在前列腺癌细胞系LNCa P、C4-2、PC3及DU145中的表达情况,并探讨VASH-1过表达对前列腺癌细胞增殖及侵袭等细胞生物学行为的影响,明确其是否可以作为一个新的指标评估和预测前列腺癌的进展,以及其是否具有抗肿瘤作用。方法:(1)采用免疫组织化学染色的方法对60例前列腺癌组织进行染色,分别检测VASH-1、VEGF-A及HIF-1α的平均累积光密度值(average optical density,AOD),并测定CD34标记的微血管密度(microvessel density,MVD)值,运用Spearman等级相关检验分析其相关性。(2)培养前列腺癌细胞系LNCa P、C4-2、PC3及DU145,分别提取细胞总蛋白及总RNA,通过Western Blot、PCR及Real-time PCR实验重复检测四种细胞系中VASH-1、VEGF-A及HIF-1α的表达情况,之后用重组质粒p Receiver-M61-VASH-1转染VASH-1表达水平较低的两个前列腺癌细胞系,应用MTT实验及Transwell侵袭实验探索过表达VASH-1对前列腺癌细胞增殖及侵袭的影响。结果:(1)VASH-1主要表达于血管内皮细胞及前列腺癌癌细胞胞浆中,并且其在前列腺癌癌细胞胞浆中的表达量明显多于血管内皮细胞胞浆中;CD34表达于血管内皮细胞的胞浆中;VEGF-A主要表达于血管内皮细胞及癌细胞的胞浆及胞核中;HIF-1α主要表达于癌细胞胞核中。VASH-1及CD34、VEGF-A、HIF-1α的表达均随着Gleason评分、p T分期的升高及伴有远处转移有增加的趋势,且差异有统计学意义(P0.05),但与患者的年龄及前列腺特异性抗原(prostate specific antigen,PSA)水平无明显相关性(P0.05)。VASH-1与CD34、VEGF-A及HIF-1α的表达之间具有显著正相关性(P0.05)。(2)通过Western Blot、PCR及Real-time PCR实验发现VASH-1、VEGF-A及HIF-1α在PC3及DU145细胞系中的表达含量均高于LNCa P及C4-2细胞系;用重组质粒p Receiver-M61-VASH-1转染LNCa P及C4-2后,通过Western Blot实验证实过表达VASH-1组中VASH-1的表达量明显高于正常细胞组及对照组(P0.05);MTT实验结果提示转染质粒48小时及72小时后,过表达VASH-1组的光密度值(optical density,OD)明显低于正常细胞组及对照组(P0.05);Transwell侵袭实验提示,与正常细胞组及对照组相比,过表达VASH-1组穿过滤膜的细胞数有明显增加,且差异有统计学意义(P0.05)。结论:(1)在前列腺癌组织中,VASH-1不仅只表达于血管内皮细胞中,其在癌细胞中也有大量表达,并且随着VASH-1表达水平的增加,提示前列腺癌恶性程度的增加。VASH-1的表达特征与CD34、VEGF-A及HIF-1α三种血管活性因子的表达间存在高度一致性,证明VASH-1对血管生成具有一定影响作用。(2)重组质粒p Receiver-M61-VASH-1可以促进LNCa P及C4-2细胞系中VASH-1的表达。(3)过表达VASH-1后可以有效抑制LNCa P及C4-2的增殖及侵袭。(4)综上,VASH-1可能参与了前列腺癌的血管生成,其有望成为一个新的指标评估和预测前列腺癌的进展,并且具有一定抗肿瘤作用。
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【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.25

【参考文献】