应用高效毛细管电泳技术检测2型糖尿病肾病尿微量白蛋白的研究

发布时间：2018-12-26 14:38

【摘要】：研究目的糖尿病肾病(Diabetic Nephropathy,DN)是2型糖尿病(Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM)患者常见的并发症之一。尿微量白蛋白(microalbuminuria,m ALB)作为DN临床诊断的重要指标,在DN发病早期准确检测m ALB,对DN的治疗和预后具有重要意义。目前临床上检测m ALB的常用方法为免疫透射比浊法和放射免疫法。鉴于免疫透射比浊法的m ALB检测灵敏度较差,会造成早期DN的漏检;而放射免疫法存在放射性污染,因此寻求准确、安全检测m ALB的方法具有重要临床应用价值。近年来,毛细管电泳(Capillary Electrophoresis,CE)技术逐渐被应用于血清和尿液中微量元素的检测。本论文研究CE技术用在检测DN患者尿液中m ALB浓度的效果,并提出一种基于吸光度峰高和峰面积去测定尿样中m ALB浓度的双因素回归模型,以期提高测量尿液中m ALB浓度的准确度,为临床DN的早期诊断提供技术支持。研究方法1.实验样本分组:4组受试者尿样:正常对照组(Control)32例、单纯糖尿病组(DM)36例、早期糖尿病肾病组(DN-1)19例、临床糖尿病肾病组(DN-2)22例。样本均来自天津医科大学代谢病医院,年龄范围为35~75岁。DM、DN-1、DN-2组以免疫透射比浊法检测结果进行分组。2.尿样处理:将尿样经离心后取上清液,并按1:1000比例向上清液中加入苯甲基磺酰氟(PMSF),置于-80℃低温保存。3.CE测试参数确定:制备m ALB标准溶液,采用控制变量法,确定CE检测m ALB时所采用的最佳缓冲液的浓度、p H值,毛细管电泳的波长、电压,以及添加剂(十二烷基硫酸钠)的浓度值。4.实验数据获取:在CE最佳实验条件下,测量6种浓度m ALB标准溶液的吸光度峰高和峰面积。5.分别建立三类线性回归模型:吸光度峰高与m ALB浓度的线性回归模型;吸光度峰面积与m ALB浓度的线性回归模型;吸光度峰高、峰面积与m ALB浓度的二元线性回归模型。6.三类回归模型的检验与评价:对三类回归模型分别进行F检验和复相关系数检验,评价模型的显著性和复相关性,确定优化回归模型。7.应用优化的回归模型测定4组尿样的m ALB浓度:在CE最佳实验条件下,基于m ALB吸光度峰高和峰面积,应用优化回归模型分别测定4组尿样的m ALB浓度。8.统计学处理:应用方差分析(ANOVA)方法对4组尿样m ALB浓度进行统计比较,根据尿样中m ALB浓度将受试者重新入组,分析与免疫透射比浊法入组的差异。研究结果1.基于实验数据确定三类回归模型:(1)吸光度峰高-m ALB浓度的线性回归模型:y=3.34 x1-4.94,F检验:置信度P=0.001;复相关系数检验:R=0.9979;拟合残差为0.0042(2)吸光度峰面积-m ALB浓度的回归模型:y=0.12 x2+17.5F检验:置信度P=0.001;复相关系数检验:R=0.9983;拟合残差为0.0033(3)吸光度峰高、峰面积与m ALB浓度的二元线性回归模型:y=1.05 x1+0.08 x2+6.76F检验:置信度P=0.001;复相关系数检验:R=0.9992;拟合残差为0.0017二元线性回归模型的复相关系数R值明显大于一元线性回归模型,选取二元线性回归模型为优化模型测定4组m ALB浓度。2.应用优化线性回归模型测定4组m ALB浓度:应用优化的吸光度峰高、峰面积与m ALB二元线性回归模型,测定各组尿样中m ALB浓度:Control组为12.18±0.33mg/L;DM组为14.23±0.40mg/L;DN-1组为107.07±8.30mg/L;DN-2组为494.60±50.01mg/L,可见,DM组与Control组无统计学差异;DN-1组显著高于Control组和DM组;DN-2组显著高于其他三组。3.应用优化的二元线性回归模型测定4组尿样中m ALB浓度,根据m ALB浓度分组,结果显示:DM组中有两例患者尿样中m ALB浓度高于DN-1入组标准20mg/L,这两例患者按m ALB标准为早期DN(DN1);一例DN-1患者尿样中m ALB浓度高于DN-2入组标准200mg/L,该患者按m ALB标准为临床DN期(DN-2),以上结果提示应用CE方法检测尿样m ALB浓度可能检测出免疫透射比浊法漏检的DN-1和DN-2组。研究结论1.应用吸光度峰高、峰面积两个因素建立的测定m ALB浓度的二元线性回归模型,复相关系数R值优于一元线性回归模型,提示该二元线性回归模型是测定m ALB浓度的优化模型。2.应用优化二元线性回归模型测定DM组和DN-1组尿液m ALB浓度差异显著性高,应用优化二元线性回归模型测定m ALB浓度能更准确区别DM组和DN-1组,提示优化模型后测定m ALB浓度在检测DN早期灵敏度更高。3.应用CE检测4组尿样,其结果优于免疫透射比浊法对DN-1和DN-2组的检出率:40例免疫透射比浊法为阴性的DM组中2例为早期DN(DN-1);用免疫比浊法检测的27例早期DN(DN-1)中,1例由CE技术检测为临床DN期(DN-2),提示CE方法检测m ALB浓度优于免疫透射比浊法。
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【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R587.2;R692.9

【参考文献】