Eg5、PCNA在人膀胱癌组织的表达及其对膀胱癌细胞生物学行为的影响

发布时间：2019-01-07 16:27

【摘要】：【背景与目的】在我国，膀胱癌发病率居男性泌尿系统肿瘤第一位，死亡率居第二位，其中绝大多数为膀胱移行细胞癌，由于具有复发性、侵袭性、产生获得性耐药等特点，其治疗效果常不理想。所以寻找与膀胱癌恶性生物学行为密切相关的生物学标记，并根据其生物学特点利用合理而及时的治疗方法，提高膀胱癌患者的总体生存率，一直是临床医生研究的重要课题之一。纺锤体驱动蛋白Eg5是驱动蛋白超家族中成员之一，是有丝分裂的关键蛋白，参与细胞增殖。有学者研究表明人类多种恶性肿瘤（例如肾癌、胰腺癌）组织中存在Eg5表达失控，其高表达被认为与肿瘤的发生发展密切相关。PCNA是与细胞增殖周期有关的蛋白，能客观评估肿瘤细胞生物学活性和所处的生长状态，而处于静止状态的细胞PCNA呈阴性表达，因此PCNA被用来作为肿瘤增殖的标志。 Eg5参与肿瘤细胞增殖，在膀胱癌中研究少见，而PCNA是最常使用的肿瘤细胞增殖的标志，广泛应用于评估肿瘤增殖能力，二者在膀胱移行细胞癌之间的相关性尚未见报道，二者是否具有协同促进肿瘤细胞增殖作用，其预后价值是否具有实用价值等都有待进一步证实。鉴于此，本研究运用免疫组化法检测Eg5和PCNA在膀胱移行细胞癌中的表达情况，对二者间相关性进行初步研究，旨在了解其在膀胱肿瘤发生、发展中的作用及临床意义；利用siRNA干扰T24细胞中Eg5蛋白表达，探讨其对T24细胞生物行为的影响。【方法】 1.本实验收集12例正常膀胱黏膜组织和44例外科手术切除膀胱癌标本，应用免疫组化SP法检测不同临床分期及病理分级的BTCC标本和正常膀胱黏膜组织中Eg5和PCNA表达情况，并对两者表达情况与BTCC临床分期、病理分级及预后情况、两者在BTCC中表达有无相关性进行了统计分析。 2.化学合成针对Eg5的小干扰RNA，通过脂质体转染至T24细胞中，应用Westernblot法检测转染后T24细胞中Eg5蛋白表达，采用台盼蓝拒染实验检测细胞死亡率，用噻唑蓝（MTT）比色分析法和平板克隆形成实验检测细胞增殖抑制率，通过细胞划痕实验检测细胞的迁移能力。【结果】 1.Eg5和PCNA在BTCC中的阳性率分别为81.8%和77.3%，二者表达与患者的临床分期、病理分级、生存率等有相关性（P0.05），BTCC中Eg5、PCNA蛋白表达呈正相关（r=0.447）。 2.siRNA干扰可降低Eg5蛋白表达；台盼蓝实验提示，干扰组细胞死亡显著高于空白对照组及阴性对照组，干扰组的克隆形成率下降，与空白对照组和阴性对照组比较差异有统计学意义；MTT结果提示，干扰Eg5基因表达后，T24细胞的增殖率明显下降；划痕实验结果显示干扰组细胞迁移能力受到明显抑制（P0.05）【结论】 1.Eg5、PCNA在BTCC组织中高表达，且与BTCC的临床及病理学分期分级密切相关，，在膀胱癌发生、发展中起重要作用，可作为判断预后的指标。 2.Eg5基因在膀胱移行细胞癌起重要作用，干扰Eg5基因能有效抑制T24细胞的增殖与迁移，加速细胞死亡，Eg5有望成为膀胱癌基因治疗的新靶点。
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【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.14

【参考文献】