miR-340通过靶向HMGN5抑制前列腺癌细胞的致瘤潜力

发布时间：2019-02-23 09:44

【摘要】：前列腺癌是一种世界性的常见癌症,严重威胁男性生活健康。微小RNA(micro RNAs)异常表达广泛参与肿瘤的发生,mi R-340已被报道在不同癌症类型中抑制肿瘤生长。然而,mi R-340是否在前列腺癌中发挥重要作用目前尚未见报道。因此本研究的目的是探索mi R-340在前列腺癌中的表达模式和其功能。然后验证mi R-340是否通过其靶基因HMGN5抑制前列腺癌增殖和侵袭,为前列腺癌提供了新的可能的治疗靶点。本课题包括以下3部分:第一部分:mi R-340在前列腺癌细胞和组织中的表达研究。第二部分:mi R-340对前列腺癌细胞生物学行为的影响。第三部分:mi R-340靶基因及其肿瘤抑制机制初步研究。第一部分:mi R-340在前列腺癌细胞和组织中的表达研究方法:1)收集标本,包括20例前列腺癌癌组织与20例配对的癌旁组织标本。2)使用RPMI 1640培养PC-3、22RV-1、DU-145和LNCa P前列腺癌细胞。RWPE-1正常人前列腺上皮细胞无血清培养基培养。3)采用RT-PCR检测前列腺癌癌组织与癌旁组织标本中mi R-340的表达水平,以及前列腺癌细胞系和正常人前列腺上皮细胞mi R-340的表达水平。结果1)与癌旁组织相比,前列腺癌组织中mi R-340的表达明显下降。2)与正常人前列腺上皮细胞相比,前列腺癌细胞系mi R-340的表达明显下降。结论:mi R-340在前列腺癌组织和癌细胞系表达均显著下调。第二部分:mi R-340对前列腺癌细胞生物学行为的影响方法:1)用细胞转染的方法转染mi R-340 mimics和anti-mi R-340至前列腺癌细胞考察增加或抑制者细胞中mi R-340表达对列腺癌细胞增殖和迁移的影响。2)采用MTT法及克隆形成实验检测mi R-340过表达及抑制mi R-340表达对前列腺癌细胞增殖的影响。3)采用TUNEL方法检测mi R-340过表达及抑制mi R-340表达对前列腺癌细胞凋亡的影响。4)采用western blot检测mi R-340过表达及抑制mi R-340表达对前列腺癌细胞凋亡相关蛋白caspase-3表达水平的影响。5)应用基于Transwell小室的侵袭实验检测mi R-340过表达及抑制mi R-340表达对前列腺癌细胞侵袭能力的影响。结果:1)mi R-340过表达可以抑制前列腺癌细胞增殖,抑制其表达可以诱导前列腺癌细胞增殖。2)mi R-340过表达可以抑制前列腺癌细胞克隆形成,抑制其表达可以增加前列腺癌细胞克隆形成。3)mi R-340过表达可以促进前列腺癌细胞凋亡,沉默mi R-340表达可以抑制前列腺癌细胞凋亡。4)mi R-340过表达可以抑制前列腺癌细胞侵袭,沉默mi R-340表达可以促进前列腺癌细胞侵袭。结论:在前列腺癌细胞中mi R-340过表达能够显著抑制前列腺癌细胞增殖、诱导其凋亡、抑制其侵袭能力。第三部分:mi R-340靶基因及其肿瘤抑制机制的初步研究方法:1)构建含有野生型和突变型HGMN5 3’UTR的mi R-340结合元件的荧光素酶表达质粒,与mi R-340 mimics或anti-mi R-340共转染至DU-145细胞考察HMGN5是否是mi R-340的直接靶基因。2)采用荧光定量PCR检测mi R-340 mimics或anti-mi R-340对HMGN5m RNA表达的影响。3)采用Western blot检测mi R-340 mimics或anti-mi R-340对HMGN5蛋白以及Bcl-2,cyclin B1和MMP9蛋白表达的影响。4)共转染HMGN5和mi R-340 mimics考察HMGN5过表达对mi R-340mimics诱导的前列腺癌细胞生物学行为的影响。5)Spearman分析前列腺癌组织中HMGN5 m RNA的表达与mi R-340表达水平相关性。结果:1)mi R-340可直接靶向HMGN5基因。2)mi R-340过表达明显降低前列腺癌细胞HGMN5 m RNA及蛋白的表达。相反,抑制mi R-340能明显增加HGMN5 m RNA及蛋白表达。3)mi R-340过度表达明显抑制前列腺癌细胞Bcl-2、cyclin B1和MMP9蛋白的表达。相反,沉默mi R-340可增加这些蛋白表达。4)mi R-340过表达抑制前列腺癌细胞增殖和侵袭的作用可以被HMGN5过表达所逆转。5)前列腺癌组织中HMGN5 m RNA的表达与mi R-340得表达水平呈显著负相关。结论:确定HMGN5为前列腺癌细胞mi R-340的直接靶基因,mi R-340过表达通过负调控HMGN5抑制前列腺癌细胞致肿瘤潜力。我们首次报道了mi R-340在前列腺癌中的关键作用以及mi R-340和HMGN5的直接关系。因此,本研究不仅提供了前列腺癌的肿瘤发生的分子基础,而且还提示了前列腺癌的潜在治疗靶点。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.25

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本文编号：2428694