高糖对大鼠膀胱平滑肌细胞中钙库操控的钙离子通道的作用研究

发布时间：2019-04-12 14:32

【摘要】：目的:探索高糖对大鼠膀胱平滑肌细胞(bladder smooth muscle cells,BSMCs)中钙库操控的钙离子通道(store-operated calcium channel,SOCC)的影响。通过高糖处理BSMCs,模拟糖尿病膀胱(diabetes cystopathy,DCP)体外环境,探究BSMCs中SOCC的相关变化,为DCP的病因学及其治疗提供新的思路。方法:使用Ⅱ型胶原酶分离S-D大鼠BSMCs,并用α-SMA进行免疫荧光鉴定。分离的原代BSMCs进行培养传代。将传至第3-5代的BSMCs同步化后根据培养基成分及浓度分为:正常葡萄糖浓度组(葡萄糖5.5mmol/L,NG组),甘露醇高渗组(葡萄糖5.5mmol/L+甘露醇19.5mmol/L,OC组),高葡萄糖浓度组(葡萄糖25mmol/L,HG组)三组,于37℃、5%CO2的孵箱中培养2.5天。各组BSMCs负载Fluo-4AM,通过激光共聚焦显微镜观察记录三组BSMCs激活(CPA,10umol/L)和抑制SOCC(SKF-96365,10umol/L)后细胞内荧光强度值,计算其荧光强度值(F1)与背景荧光强度值(F0)的比值(F1/F0)来比较各组间钙离子浓度的变化。通过RT-qPCR法和Western blot法检测三组BSMCs中SOCC相关蛋白STIM1和Orai1的表达情况。结果:经过α-SMA免疫荧光鉴定证实成功分离培养出膀胱平滑肌细胞。HG组加入SOCC激动剂CPA后较NG组、OC组钙离子浓度的显著增加(2.105±0.105,P0.05),加入SOCC抑制剂SKF-96365后较NG组、OC组钙离子浓度的显著降低(1.610±0.109,P0.05),NG组与OC组之间无明显差异(P0.05);HG组BSMCs中STIM1和Orai1的mRNA表达水平以及蛋白表达水平明显高于NG组、OC组(P0.05),NG组与OC组之间无明显差异(P0.05)。结论:经过2.5天高糖作用下能激活大鼠膀胱平滑肌细胞的SOCC,可能参与组成细胞外钙离子内流部分,从而参与相应的病理生理机制。另外,在高糖作用下,BSMCs中SOCC组成分子STIM1和Orai1表达水平发生改变可能为DCP的病理机制提供体外实验依据,从而为DCP病因学研究提供新的思路。但高糖对SOCC的作用机制尚不清楚,仍需后续研究。
[Abstract]:Objective: To explore the effect of high glucose on calcium channel (SOCC) in the control of the calcium pool in the bladder smooth muscle cells (BSMCs) of the rat. The changes of SOCC in BSMCs were investigated by high-glucose treatment of BSMCs, and the changes of SOCC in BSMCs were investigated. Methods: The type 鈪，

本文编号：2457103