黄连素对乏氧前列腺癌细胞株体内与体外放射增敏作用及其机制研究

发布时间：2019-07-15 11:39

【摘要】：目的：研究黄连素对乏氧人前列腺癌细胞株LNCaP体内及体外的放射增敏作用并探讨其可能的作用机制。方法：体内：应用MTT方法检测黄连素对LNCaP细胞生存率的影响；通过细胞克隆形成实验，观察不同浓度黄连素对LNCaP细胞放疗敏感性的影响；采用流式细胞仪，检测细胞凋亡率，免疫印迹法（WB）、免疫荧光法检测细胞内HIF-1α、VEGF蛋白的表达变化。体外：建立前列腺癌LNCaP细胞裸鼠移植瘤模型；移植瘤平均体积增至约125mm3时，采用随机数字表法将裸鼠24只分4组：对照组、单纯药物组（5mg/kg黄连素）、单纯照射组（8Gy）、药物+照射组（5mg/kg黄连素+8Gy）。36天后测量移植瘤体积，计算肿瘤体积抑制率，并对移植瘤标本进行Western blot检测移植瘤组织中HIF-1α及VEGF蛋白的表达。结果：体内：黄连素对LNCaP细胞有一定的毒性作用，并显现剂量-效应和时间-效应关系，，24h时黄连素的IC50为220.36μM。经克隆形成实验证实，黄连素对LNCaP细胞有明显的增敏作用，并且随着黄连素浓度的增加，放疗敏感性增加，30μM、50μM的黄连素对LNCaP细胞的放射增敏比（SER）分别为：1.40、1.77。药物联合照射组的乏氧细胞凋亡率较单纯照射组的乏氧细胞凋亡率明显增加，并且随着药物浓度的增加，凋亡率增加；WB和免疫荧光结果均显示药物联合照射组较对照组、单纯药物组和单纯照射组的HIF-1α、VEGF蛋白的表达明显降低，与单纯照射组比较，有统计学意义(p＜0.05)。体外：药物+照射组裸鼠移植瘤体积为（505.0±110.7）mm3，显著低于单纯药物组（1384.2±182.0）mm3和单纯照射组(1119.7±248.2) mm3（p＜0.05），其抑制率达74.3％。Western blot检测发现，药物+照射组移植瘤组织中HIF-1α、VEGF蛋白表达水平较单纯照射组明显降低。结论：黄连素对乏氧人前列腺癌细胞株LNCaP细胞体内及体外均有放射增敏作用，其机制可能与抑制HIF-1α和VEGF蛋白表达有关。这些研究结果表明黄连素可以作为前列腺癌放射的增敏药物，也为黄连素的深入研究提供了实验基础和理论依据。
文内图片：克隆形成实验表2、LNCaP细胞各组多靶单击模型拟合曲线的生物学参数

图片说明： NCaP 细胞增殖的抑制作用细胞存活率（%）12h 24h 48h 00±6.75 100.00±3.17 100.00±13.8 100.004±2.41 92.93±3.89 87.81±3.81 72.27±2±2.78 64.36±1.37 58.30±4.93 57.13±7±1.33 59.92±3.55 52.27±7.83 51.60±1±2.02 59.83±3.43 51.65±7.72 49.68±5±2.48 55.07±2.99 50.99±6.23 42.24±2±1.01 49.05±1.07 46.84±3.78 36.38±3±1.06 44.61±2.71 38.55±3.94 27.97±2±1.98 39.22±1.29 24.59±1.59 24.20±乏氧 LNCaP 细胞的放射增敏作用：黄连素作用细胞放射敏感性，并呈现剂量依赖性。通过单击多 1），计算出 30μM、50μM 黄连素的放射增敏比，由此可见，黄连素对乏氧的 LNCaP 细胞具有放，黄连素放射增敏比与黄连素的浓度呈正相关性
文内图片：细胞凋亡表3细胞凋亡

图片说明：高的细胞存活率，更加准确说明细胞凋亡的变化情况，因而我们选择低于 7.9Gy的照射剂量，故凋亡实验选择 6Gy 的照射剂量。图2 细胞凋亡表3 细胞凋亡组别凋亡率（%）常氧+IR 28.6±6.0乏氧+IR 1.2±0.7 乏氧+黄连素30μM+IR 4.2±1.6*乏氧+黄连素50μM+IR 11.9±3.0*，#注：与常氧+IR组比较，p=0.0014，*与乏氧+IR组比较，p=0.0405、0.0038，#与乏氧+黄连素30μM+IR组比较，p=0.0170。4. 不同状态下的LNCaP细胞中HIF-1α、VEGF表达的比较，如图3
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.25

【参考文献】