DDX39在肾透明细胞癌增殖、转移中的作用及临床预后相关性研究

发布时间：2019-09-12 18:32

【摘要】：[目的]DDX39是RNA解旋酶DEAD-Box家族成员之一,它在体内通过调节基因表达和RNA代谢来发挥识别天然免疫功能、调节胞内信号通路、RNA转录与剪切以及调控核内表观遗传学等重要作用。而在不同肿瘤的调控过程中DDX39可以发挥抑癌或者促癌作用。DDX3 9在肾透明细胞癌(Clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)中发挥的功能以及与患者临床预后相关性尚需要进一步研究。通过我们的研究将为肾癌增殖转移的形成提供新的理论依据,为肾癌治疗寻找新的基因靶点,并且探索一种可以预测肾癌患者疗效和预后的新型分子标志物。[研究方法]1、通过Oncomine生物信息数据库,初步验证DDX39在肾透明细胞癌中的表达以及与预后关系。采用实时定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western-blot)技术进一步验证肾透明细胞癌的癌旁组织与癌组织、肾癌细胞株与正常肾小管上皮细胞株之间mRNA及蛋白表达的差异性。2.免疫组化染色肾透明细胞癌组织芯片,分析DDX39在肾透明细胞癌中的表达与患者预后相关性。3、利用siRNA (small interfering RNA)干扰和质粒转染技术,分别敲低和过表达肾癌细胞株中的DDX39,通过RT-PCR和Western-blot验证干扰和转染效率,最终构建DDX39低表达和过表达的肾癌细胞株。采用CCK8法增殖实验、平板克隆实验、Transwell细胞迁移实验、细胞侵袭实验等来验证DDX39低表达和过表达时肾癌细胞株的增殖、转移能力。[结果]1、通过Oncomine数据库检索分析以及标本验证,结果显示DDX39在肾透明细胞癌中呈高表达,癌旁组织与癌组织、肾癌细胞株与正常肾小管上皮细胞株之间DDX39表达差异明显。2.DDX39表达量与肿瘤的大小、TNM分期以及远处转移相关,单因素和多因素分析DDX39表达量与肾癌患者总生存期和无病生存期预后关系,DDX39可以作为肾癌预后独立的预测因子,其表达量越高患者预后越差。3.用siRNA干扰技术和质粒转染技术可以有效的敲低和过表达肾癌细胞株中DDX39。体外细胞功能实验结果显示,肾癌细胞株敲低DDX39后,细胞增殖和转移能力被抑制,而过表达DDX39后,肾癌细胞增殖和转移能力增强。[结论]DDX39在肾透明细胞癌中呈现原癌基因的特性,可以促进肿瘤增殖和转移。DDX39有望成为预测肾癌预后的新型分子标志物以及成为肾癌基因靶向治疗的新靶点。
【图文】：

图１－１邋ＤＤＸ３９邋ｍＲＮＡ在肾癌组织与正常肾组织间表达差异的Ｍａｔａ分析结果，逡逑ｐ邋?

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【学位授予单位】：第二军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.11

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本文编号：2535288