外周血miR-200c在膀胱癌中应用价值初步研究

发布时间：2019-09-26 20:04

【摘要】：目的 目前国内外研究证实microRNAs异常表达与肿瘤发生和实性肿物的进展有关,miR-200s决定着肿瘤细胞的上皮表型并控制着肿瘤的侵袭性和迁移性。与传统的从组织中获取microRNAs相比,外周血中获取nicroRNAs,具有更加微创,减轻取样过程中病人的疼痛和术后反应,大大缩短临床采集样本的时间,可同时得出多项与疾病有关的参数以及可反复操作、动态监测等优点。因此,我们假设定量检测外周血中1niR-200s中具有上皮特性的nicroRNAs,可能作为膀胱癌一种有效的生物标志物。 方法 搜集国内外文献证实,：niR-200s中1niR-200c在膀胱癌和健康人群的膀胱组织中具有明显差异,可作为膀胱癌诊断,恶性程度评估及预后判断的生物标志物。本实验共包含75例研究对象,所有研究对象均已了解外周血样本采集意义并签署知情同意书。实验组为膀胱移行细胞癌患者,无其它肿瘤病史,共58例；对照组为随机健康体检者17例。实验组术后均经病理证实为膀胱移行细胞癌。根据肿瘤细胞的分化程度,按照WHO2004分级,分为：低度恶性倾向尿路上皮乳头状瘤(Papillary urothelial neoplasms of low malignant potential, PUNLMP)、乳头状尿路上皮癌低分级、乳头状尿路上皮癌高分级三个级别。按照国际抗癌联盟(UICC)2009年第7版TNM分期法对膀胱癌进行分期,分为Tis原位癌、Ta非浸润性乳头状癌、T1肿瘤侵及上皮下结缔组织、T2肿瘤侵犯肌层、T3肿瘤侵犯膀胱周围组织、T4侵犯以下任一器官或组织,如前列腺、子宫、阴道、盆壁和腹壁。非浸润性膀胱癌包括Tis、Ta、T1,浸润性膀胱癌包括T2、T3、T4。对照组将有明确膀胱癌或肿瘤家族史、腺性增生性膀胱炎、前列腺特异抗原(PSA)大于4.0ng/ml的前列腺增生患者、甲胎蛋白(AFP)大于400mg/ml、癌胚抗原(CEA)大于15.0ug/L等患者排除。同时收集58例实验组中30例患者的组织样本,包括肿物和正常黏膜组织,组织样本获取前经患者同意并再次签署知情同意书。收集实验对象的临床病理资料,包括性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤数目、TNM分期、分级情况等,并以单因素方差分析或独立样本t检验,检验miR-200c相对表达水平与各临床病理因素之间的相关性。每例被研究者应用DEPC管留取血标本5ml,应用EDTA抗凝,于4℃条件下1000r/min离心10min,收集血浆存于DEPC管中,立即投入到液氮中冷冻,保存于-80℃冰箱中直到RNA分离；正常组织样本取距肿瘤2.5cm以上正常膀胱粘膜,组织样本获取后30min内用锡纸包裹装入冷冻管,液氮冷冻,-80℃保存。采用实时定量RT-PCR法检测标本中1miR-200c含量,以TRIzol提取RNA,基因特异性颈环形逆转录引物进行逆转录反应。逆转录完成后,应用SYBR→Premix Ex TaqTM荧光试剂进行相对定量研究,以U6RNA为内参,计算miR-200c相对表达强度,结果以均数±标准差表示。采用SPSS17.0for windows统计软件包,以student t检验比较实验组和对照组中以及实验组中不同分期、分级的膀胱癌标本中miR-200c相对表达水平差异,P0.05有统计学差异。绘制ROC曲线,计算曲线下面积,评估其灵敏度、特异度和总符合率。 结果 1.膀胱癌患者外周血中miR-200c表达水平与正常对照相比明显升高(P=0.018)。 2. miR-200c的表达水平与TNM分期、分级情况存在相关性(P0.05),与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤数目等各临床病理参数之间无显著相关性(P0.05)。 3.血液样本绘制ROC曲线,得出曲线下面积(AUC-ROC)是0.88。观察到miR-200c诊断膀胱癌的灵敏度、特异度和总符合率分别为79.20%、77.30%及72.00%。 4.膀胱癌组织中与正常组织相比,miR-200c表达水平明显升高,其诊断膀胱癌的灵敏度、特异度和总符合率分别为84.00%、82.90%及85.00%。 5.绘制—ROC曲线,结果显示血液和组织中：-niR-200c预测浸润性肿瘤的灵敏度和特异度均为47.10%和83.30%,曲线下面积相同为0.64；预测高级别肿瘤的灵敏度和特异度均为68.60%和73.90%,曲线下面积相同为0.71。 结论 1.外周血miR-200c表达水平与膀胱癌关系密切,与健康人群相比,异常高表达,即单个上皮和肿瘤表达的miR-200c血液水平能够区分膀胱癌患者和健康对照组。 2. miRNA-200c的表达水平与T分期、病理分级相关,且在膀胱癌患者中,随病理分级和临床分期的增高,表达水平降低。提示miRNA-200c可能与膀胱癌的浸润、转移具有相关性。 3. miR-200c对膀胱癌诊断具有较高的灵敏度、特异度和总符合率,且组织中miR-200c的诊断性能要高于外周血。应用外周血样本具有方便获取,减轻病人痛苦等独特优势,但1miR-200c在膀胱癌诊断及预后评估方面的应用尚需进一步研究。 4.膀胱癌肿瘤组织中miR-200c表达水平较患者外周血中高,其差异具有统计学意义；健康人群外周血与膀胱正常组织表达水平差异无统计学意义。提示miR-200c的表达水平与肿瘤相关。 5.组织和血液中miR-200c预测浸润性和高级别肿瘤的诊断准确性较低,在组织和血液中该预测能力相同,且预测高级别肿瘤的敏感度高于预测浸润性肿瘤,但特异度稍低。提示miR-200c有望成为监测肿瘤进展的生物标志物。
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R737.14

【参考文献】

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本文编号：2542304