tTG在大鼠糖尿病肾病中的作用及乌司他丁干预后的影响

发布时间：2019-10-03 11:46

【摘要】：随着生活水平的不断提高，糖尿病发病率正逐年攀升。据调查显示：2型糖尿病患者大约占总患病数的95%以上。糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）是最常见和最严重的DM慢性微血管并发症之一，其主要病理变化是肾脏高灌注、高滤过，肾小球基膜增厚以及肾小球系膜区细胞外基质（extracellular matrix，ECM）积聚，进而导致弥漫性和结节性肾小球硬化，并出现高血压、蛋白尿及肾功能不全等临床症状。传统观点认为，糖尿病慢性并发症是胰岛素相对或绝对不足所诱发的高血糖症状。近年来研究发现，糖尿病主要与血流动力学改变、糖代谢紊乱、基因多态性、ECM降解、脂质过氧化、细胞以及血管活性因子、炎症、遗传、生长因子等因素密切相关。 tTG作为一类Ca2+依赖的酶，可通过酰基转移作用在体内产生多种反应，进而促使FN和胶原等在内的ECM成份发生交联，形成牢固结构，进而抵抗降解。乌司他丁是从健康成年男性新鲜尿液中分离纯化出来的一种糖蛋白，由143个氨基酸组成，相对分子质量约67KD。它属蛋白酶抑制剂，对胰蛋白酶、α-糜蛋白酶、丝氨酸蛋白酶及粒细胞弹性蛋白酶、透明质酸酶、巯基酶、纤溶酶等多种酶有抑制作用。另外，乌司他丁具有稳定溶酶体膜，可清除氧自由基以及抑制炎症介质释放的作用。临床上可用于治疗急性胰腺炎，慢性复发性胰腺炎。在本实验中，Wistar大鼠随机被分为6组，包括正常对照组、STZ诱导的模型组（25mg/kg）、STZ+卡托普利组（5mg/kg/d），STZ+乌司他丁组（高中低，25mg/kg/d，20mg/kg/d，15mg/kg/d）。通过HE染色测定大鼠肾脏的变化；通过Masson三色染色检测肾脏的胶原含量；通过免疫组化以及实时PCR分析tTG的基因和蛋白表达。结果表明，正常组大鼠空腹血糖稳定且保持在稳定区间（4.9~6.1）；模型组大鼠血糖值较正常组明显升高（P0.05）；而卡托普利和乌司他丁组大鼠血糖较模型组有所降低（P0.05）；HE染色、Masson染色及tTG基因和蛋白结果说明乌司他丁可能具有降低tTG蛋白表达，起到防治DN的作用。
【图文】：

糖尿病肾病

2图.1 糖尿病肾病1.1 组织型转谷氨酰转移酶与糖尿病肾病组织型转谷氨酰胺酶（tissue transglutaminases，tTG）是转谷氨酰胺酶家族（TGs）中重要的成员之一[24]。tTG 是一类具有催化蛋白质谷氨酰胺残基与赖氨酸残基交联活性的酶[23]。另外，tTG 具有结合和水解 GTP 的功能，且在信号转导过程中发挥着重要作用[25]。研究发现，tTG 是 Ca2+依赖剂，，谷氨酰转移酶被激活后，可通过酰基转移作用参与体内多种反应，能使包括 FN、层粘蛋白和胶原在内的大部分 ECM 蛋白成分之间发生交联，形成牢固结构，抵抗降解[26]。tTG分布于细胞胞浆中

线粒体

[35]。而 tTG 可通过线粒体（图.2）的作用促使 tTG 达到高极化状态并改变其氧化还原的状态，进而增强细胞对凋亡的敏感性[36]。在细胞凋亡的后期，细胞内的 Ca2+浓度升高，进而可激活 tTG 对亚细胞进行交联调节，造成大量细胞内蛋白多聚化，进而形成不溶性结构[37]。该结果提示，tTG 可能限制了细胞内的有害成分释放到周围组织进而引起炎症或自身免疫反应。图. 2 线粒体作用1.3 tTG 交联产物与 ECM 转换失平衡ECM 是细胞合成且分泌到细胞外的一种生物大分子构成的网状结构，其主要由胶原蛋白、蛋白聚糖、糖胺聚糖、糖蛋白以及弹性蛋白等五大类物质构成的物质，其主要分布在基膜和间隙结缔组织[38]。ECM 的含量受合成和降解过程的调控[39]。在正常情况下
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R587.2;R692.9

【参考文献】