miR-124通过调控flotillin-2对精子顶体形成的作用和机制研究

发布时间：2019-11-28 22:37

【摘要】：目的：研究miR-124通过调控flotiliin-2对精子发生过程中顶体形成的作用,并进一步探讨miR-124在顶体形成过程中的表达机制。方法：首先,运用生物信息学软件验证miR-124与flotillin-2的mRNA 3'-UTR存在互补结合位点；然后,采用双荧光素酶报告基因技术探讨miR-124对flotillin-2的靶向调控关系；接着,采用睾丸网微注射技术,将miR-124活性片段直接注射入三周龄雄性小鼠的生精小管,48小时后运用实时荧光定量PCR和蛋白免疫技术验证miR-124对flotillin-2的影响；最后,在睾丸网微注射三周后,运用光学显微镜和透射电镜观察小鼠精子的形态。结果：生物信息学证实miR-124与flotillin-2的mRNA 3'-UTR存在直接互补结合位点。当miR-124表达上调,flotillin-2的表达水平下降,miR-124对flotillin-2的表达起着负向调节的作用。与对照组相比,实验组的精子畸形率明显增加(28.5%vs.19.9%,P=4.68*10-5),特别是头部畸形(20.7%vs.13.7%,P=0.025),这些差异存在统计学意义,并且大部分头部畸形精子的顶体都有异常。透射电镜显示头部畸形小鼠精子的超微结构为：1)顶体缺失：2)顶体形态异常--顶体中存在分散的、没有融合的小颗粒或小囊泡；存在较大的顶体囊泡；存在残留的或退化的高尔基复合体。结论：miR-124可以通过调控flotillin-2的表达影响精子顶体的形成,为探索精子发生过程中顶体形成的的分子机制奠定基础,同时为男性不育的诊断和治疗提供新的理论依据和干预靶点。
【图文】：

图１：顶体形成模式图。逡逑来自邋Ｒａｍａｌｈｏ－ＳａｉＵｏｓ邋Ｊ邋，邋ｅｔ邋ａｌ逡逑ｎｔｒｏｌ邋ｏｆ邋ｍｅｍｂｒａｎｅ邋ｆｕｓｉｏｎ邋ｄｕｒｉｎｇ邋ｓｐｅｒｍｉｏｇｅｎｅｓｉｓ邋ａｎｄ邋化ｅ邋ａｃｒｏｓｏｍｅ邋ｒｅａｃｔｉｏｎ》。逡逑研究中，我们发现了邋ｆｌｏｔｍｉｎ－２这个蛋白在精子变形中起着非常重要方式与精子顶体生成过程中的高尔基复合体相关蛋白非常相似。该研ｉｌｌｉｎ－２可能参与小鼠精子顶体的形成［１３１逡逑ＮＡ（ＭｉｃｒｏＲＮＡｓ，ｍｉＲＮＡｓ）是一类在生物体内广泛表达的约由２１－２３内源性、高保守、非编码、单链小分子ＲＮＡ。它们可Ｗ通过完全或不对原则与靴基因ｍＲＮＡ的３’－非翻译区（３’－ＵＴＲ）或５’－非翻译区（５’－Ｕ录后水平通过对鞭ｍＲＮＡ降解或者抑制翻译过程从而发挥负性调控作等在秀丽新小杆线虫的研究中首先发现了ｍｉＲＮＡ的存在ｔＷ，走在线虫发育调控的研究中报道了第二个ｍｉＲＮＡ－－ｌｅｔ－７［＂］，从而揭开的序幕。在过去的几十年里，人们发现ｍｉＲＮＡｓ在各种不同的生理和

睾丸网微注射技术注射针的制作。ａ图为拉针仪，ｂ图为磨针仪。逡逑注射前，所有操作过程中需要巧到的注射针、卧管、枪头理，并经高压蒸汽灭菌消毒；逡逑管在拉针仪上拉成一定角度的注射针，然后在磨针仪上将于穿透组织壁，开口直径约４０ｕｍ；逡逑的注射计尾部用打火机熏烤一下，，装进显微操作臂，旋好鼠体重，按照体重用１％戊己比妥钢腹腔注射麻醉小鼠，小于硬纸板上；逡逑除小鼠腹部的毛，随后用９５％酒精消毒，逐层打开小鼠腹与睾丸相连的脂肪垫，轻轻将该脂肪垫拖出腹腔，小鼠的睾；逡逑０．２％台盼蓝作为指示剂的ｍｉＲＮＡ吸入注射针，约５ｕｌ三叉光源的亮度及显微镜的放大倍数（一般小于或等于２
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R698.2

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本文编号：2567178