Tie2信号激活对肾小管间质病变的改善作用

发布时间：2020-05-27 07:33

【摘要】：背景:慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)是指由各种原因导致的肾脏慢性结构和功能障碍,其中肾脏损伤史大于3个月。肾脏纤维化是各种肾脏疾病进展到终末期肾病(end stage of renal disease,ESRD)的主要病理学基础,包括肾小球硬化、肾小管萎缩以及肾间质纤维化等病理过程。在肾脏结构中,由于肾小管间质体积占总体积的90%,因此慢性肾小管间质病变在CKD的发生发展中起着重要的作用。微血管损伤后将引发如缺氧、炎症、内皮细胞转分化以及血管生成因子失衡等一系列的级联反应,最终导致肾纤维化,所以保护微血管可以缓解进行性肾损伤和改善肾小管间质病变。在血管生成素家族中,激活Ang1/Tie2信号系统具有抗血管炎症反应、降低血管通透性以及稳定血管和促进血管生长等作用。在形成慢性肾小管间质病变的基础上,有关激活Tie2信号来减少肾小管间质纤维化发生的研究尚未见相关报道,本实验拟探讨Tie2信号激活对叶酸肾病小鼠小管间质病变的改善作用,旨在为治疗慢性肾小管间质病变提供潜在的治疗靶点。方法:选取4周龄雄性CD1小鼠,向小鼠腹腔注射叶酸(溶解于5%Na HCO3,浓度为24mg/m L,剂量为240mg/kg),建立小鼠叶酸肾损伤模型组(F组),腹腔注射5%Na HCO3建立正常对照组(Con组)。实验第7天,称量12只F组小鼠和6只Con组小鼠体重,取各小鼠右肾,观察肾脏外观并称量肾重。将右肾一分为二,其中一半右肾做Masson染色和免疫组化,另一半右肾做Western blot。Masson染色观察组织病理,免疫组化检测成纤维细胞特异性蛋白-1(FSP-1)阳性表达情况,Western blot检测血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)表达情况。实验第9天,将12只F组小鼠分为6只F+I组和6只F+T组。向Con组及F+I组小鼠腹腔内注射大鼠Ig G抗体(1mg/只),向F+T组小鼠腹腔内注射大鼠抗小鼠激发型Tie2单克隆抗体(1mg/只)。实验第28天,称量三组小鼠体重,取各小鼠左肾,观察肾脏外观并称量肾重,取一半左肾做Masson染色和免疫组化,另一半左肾做Western blot,进行每只鼠前后各项指标分析。结果:1、肾重/体重比值(%):第7天,F+T组(0.8859±0.1168)和F+I组(0.8679±0.1029)比值均大于Con组(0.6671±0.708,p0.05),提示肾脏肿大。第28天,F+T组(0.7883±0.1248)比值与Con组(0.9324±0.0937)相比无统计学差异(p0.05);F+I组(0.6781±0.0602)比值小于Con组(p0.01)。F+I组第28天比值小于同组第7天(p0.01),提示F+I组肾脏萎缩;F+T组第28天比值与同组第7天相比无统计学差异(p0.05)。2、肾小管间质病变面积/总面积比值(%):第7天,F+T组(76.61±6.81)和F+I组(74.11±8.38)比值均大于Con组(p0.0001),提示广泛肾小管间质病变。到第28天,经Tie2抗体干预的F+T组肾小管间质病变面积比值(7.47±2.22)小于同组第7天肾小管间质病变面积比值(p0.0001),经Ig G干预的F+I组肾小管间质病变面积比值(17.74±4.40)也小于同组第7天肾小管间质病变面积比值(p0.0001),但F+T组第28天面积比值与第7天面积比值的差值(69.14±6.45)大于F+I组(56.37±4.36,p0.01),提示F+T组比F+I组肾小管间质病变改善。第28天,F+T组肾小管间质纤维化面积比值(5.43±2.25)小于F+I组(15.07±4.56,p0.01),提示Tie2抗体减少肾小管间质纤维化发生。3、免疫组化:第7天,F+T组和F+I组FSP-1阳性细胞数均大于Con组(p0.0001)。第28天,F+T组FSP-1阳性细胞数小于F+I组(p0.05)。F+T组和F+I组第28天FSP-1阳性细胞数小于同组第7天(p0.001)。F+T组第28天FSP-1阳性细胞数与第7天的差值大于F+I组(p0.01)。4、Weston blot:第7天,F+T组和F+I组VCAM-1表达水平均升高(p0.01)。第28天,F+T组VCAM-1表达水平与Con组相比无统计学差异(p0.05),F+T组VCAM-1表达水平低于F+I组(p0.05)。F+T组第28天VCAM-1表达水平低于同组第7天(p0.001)。F+I组第28天VCAM-1表达水平与同组第7天相比无统计学差异(p0.05)。结论:(1)在形成慢性肾小管间质病变的基础上,Tie2信号激活能明显改善小鼠叶酸肾病肾小管间质病变,并且可以减少肾小管间质纤维化的发生;(2)Tie2信号激活可能通过降低FSP-1和VCAM-1表达,起到改善肾小管间质病变和减少肾小管间质纤维化的作用。
【图文】：

外观,肾小管间质病变

各组小鼠肾脏外观（n=6）

肾小管,肾小管间质纤维化,肾损伤,刷状缘

15结果分析：（1）Con 组肾小管结构清晰、形态正常，无异常病理表现（见图 4A）。（2）实验第 7 天，，肾损伤模型组小鼠肾脏可见明显的慢性肾小管间质病变区域括肾小管结构紊乱、大空泡变性、坏死，肾小管刷状缘脱落、粗颗粒变性，肾小皮细胞崩解、脱落、小管堵塞，间质水肿和炎性细胞浸润（见图 4B、C）。（3）实验第 28 天，F+T 组肾小管结构基本恢复正常，较第 7 天肾小管病变面少，且肾小管间质纤维化面积小于 F+I 组（见图 4D、E）。
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R692.6

【参考文献】