自噬在可溶性尿酸诱导肾小管上皮细胞炎症反应中的作用

发布时间：2020-06-17 13:52

【摘要】：目的:探寻自噬在可溶性尿酸(uric acid,UA)诱导肾小管上皮细胞(HK-2细胞)炎症反应中的作用。方法:可溶性尿酸溶液刺激HK-2细胞,用透射电镜观察自噬体,western blotting检测单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、自噬微管相关的轻链蛋白3(LC3-II)和自噬相关调控基因蛋白Beclin1的表达。分别将雷帕霉素(rapamycin,RAP)和氯喹(chloroquine,CQ)与12 mg/dL可溶性尿酸共刺激细胞12h,透射电镜观察各组细胞的自噬体,western blotting分别检测MCP-1、LC3-II和Beclin1的表达水平。用10μmol/L的Akt抑制剂Perifosine预处理细胞1h后再与12 mg/dl可溶性尿酸共同孵育细胞12h,电镜下观察自噬体,western blotting检测p-Akt和MCP-1的表达。结果:可溶性尿酸诱导HK-2细胞MCP-1、LC3-II和Beclin1表达上调,透射电镜观察到自噬体数量增加。雷帕霉素与可溶性尿酸共刺激HK-2细胞后,较之单用可溶性尿酸,自噬进一步增强而MCP-1表达减弱,氯喹则抑制可溶性尿酸的上调自噬作用而MCP-1表达增加。Akt阻断剂Perifosine和尿酸共刺激细胞后MCP-1表达减弱。结论:可溶性尿酸可诱发肾小管上皮细胞炎症,促进HK-2细胞的自噬。自噬参与调控可溶性尿酸诱导的肾小管炎症反应。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R692
【图文】：

尿酸,可溶性,细胞,肾小管上皮细胞

自噬在可溶性尿酸诱导肾小管上皮细胞炎症反应中的作用 2015 级硕士学位结果1 可溶性尿酸刺激肾小管上皮细胞产生 MCP-1。1.1 加入不同浓度的尿酸刺激 HK-2 细胞 24 小时后 WB 检测 MCP-I 蛋白表达，结果显示，可溶性尿酸刺激 HK-2 细胞 MCP-1 表达呈剂量依赖性，尿酸浓度为 12 mg/dL 时提高最显著(P＜0.05 )，见图 1A。1.2 用尿酸（12 mg/dL）分别作用细胞 0h、6h、12h、24h 和 48h 后 W测 MCP-1，结果显示：可溶性尿酸诱导 HK-2 细胞 MCP-1 表达呈时间依性,在 24 小时表达最高 ( P＜0.05 )，见图 1B。

自噬体,透射电镜观察,细胞的,尿酸

注： A: control group; B: uric acid group. scale bar: 500 nm图 2 透射电镜观察 HK-2 细胞的自噬体Figure 2. Quantitative change of autophagic vacuoles in HK-2 cell.3 可溶性尿酸刺激 HK-2 细胞表达自噬相关蛋白。3.1 不同浓度的尿酸刺激 HK-2 细胞 LC3-II,Beclin1 的表达 WB 结果表明，对照组（未刺激组）LC3-II 、Beclin1 表达水平较低，随着刺激浓度增加，LC3-II,Beclin1 的表达逐渐提高，在尿酸浓度 12 mg/dL 表达最高(P＜0.05 )，见图 3A 。3.2 可溶性尿酸刺激 HK-2 细胞后不同时间点 LC3-II,Beclin1 的表达WB 结果表明对照组（0h）表达水平较低，尿酸刺激 6 小时后LC3-II,Beclin1 表达增加，12 小时 LC3-II,Beclin1 表达最高，24 小时

【参考文献】