Prohibitin1和Prohibitin2在系膜细胞缺氧损伤中的表达及作用

发布时间：2020-06-18 07:40

【摘要】：目的:通过检测缺氧损伤后肾小球系膜细胞中Prohibitin1(PHB1)、Prohibitin2(PHB2)的表达水平,探讨PHB1、PHB2在肾小球系膜细胞缺氧损伤中的作用。方法:将体外培养的肾小球系膜细胞随机分为两组:正常组和模型组。正常组在常规条件下培养,不做任何干预处理,模型组置于缺氧小室中,充缺氧气体(950 m L·L-1 N2和50 m L·L-1 CO2)密封24h、48h建立肾小球系膜细胞缺氧损伤模型。于缺氧24h、48h后,收集细胞进行相关指标检测。倒置光学显微镜观察细胞形态,试剂盒检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量和线粒体膜电位变化情况,细胞计数CCK 8试剂盒(Cell Counting Kit-8,CCK-8)法检测细胞活力,流式细胞技术检测细胞凋亡情况,实时荧光定量PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction,Real-time-PCR)检测细胞PHB1、PHB2、转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的m RNA表达水平,Western blot法检测细胞PHB1、PHB2、TGF-β1、α-SMA、Ⅳ型胶原(collagen-IV,Col-IV)蛋白和纤维粘连蛋白(Fibronectin,FN)的蛋白表达水平。结果:1.光镜下正常组系膜细胞呈长梭型,胞体舒展饱满,排列有序,细胞间隙适中,模型组细胞呈狭长型,胞体细长,形态萎缩,细胞间隙增宽加深,细胞碎片增多,缺氧48h组细胞形态改变较缺氧24h组改变更加明显。2.与正常组相比,模型组系膜细胞的PHB1和PHB2的m RNA及其蛋白表达均显著下降(均P0.05);与缺氧24h组相比,缺氧48h组细胞的PHB1和PHB2的m RNA及其蛋白表达均显著下降(均P0.05)。3.与正常组相比,模型组系膜细胞的ROS显著升高(P0.05),线粒体膜电位显著下降(P0.05);与缺氧24h组相比,缺氧48h组细胞的ROS显著升高(P0.05),线粒体膜电位显著下降(P0.05)。4.与正常组相比,模型组系膜细胞的TGF-β1的m RNA及其蛋白表达、α-SMA的m RNA及其蛋白表达、以及Col-IV和FN蛋白表达均显著升高(均P0.05);与缺氧24h组相比,缺氧48h组细胞TGF-β1的m RNA及其蛋白、α-SMA的m RNA及其蛋白表达、以及Col-IV和FN蛋白表达均显著升高(均P0.05)。5.与正常组相比,模型组系膜细胞的凋亡率显著升高(P0.05),细胞活力显著下降(P0.05);与缺氧24h组相比,缺氧48h组细胞的凋亡率显著升高(P0.05),细胞活力显著下降(P0.05)。6.相关性分析:模型组系膜细胞的PHB1和PHB2的蛋白表达与TGF-β1、α-SMA、Col-IV和FN的蛋白表达及ROS含量、细胞凋亡率均呈显著负相关(均P0.05),与线粒体膜电位、细胞活力均呈显著正相关(均P0.05)。结论:在系膜细胞缺氧模型中,PHB1和PHB2表达显著降低参与了细胞缺氧损伤过程,缺氧时间越长,PHB1和PHB2表达降低越明显,细胞损伤越重。其机制可能与PHB1和PHB2表达降低使ROS升高,线粒体膜电位降低,上调TGF-β1和ɑ-SMA表达从而导致ECM积聚有关。
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R692
【图文】：

Prohibitin1 和 Prohibitin2 在肾小球系膜细胞缺氧损伤中的表达及作用 2018 届硕士学位3.结 果3.1 系膜细胞形态学变化光镜下观察正常组系膜细胞呈长梭型，胞体舒展，形态饱满，细胞隙适中，模型组系膜细胞呈狭长型，胞体细长，形态萎缩，细胞间隙增加深，与正常组细胞有明显的差异，缺氧 48h 组与缺氧 24h 组比较，细形态改变的更加明显。见图 1-1。正常细胞形态 缺氧 24h 细胞形态 缺氧 48h 细胞形态

图 1-2 两组系膜细胞各时间点活力比较Fig.1-2 Comparison of cell activity in the two groups of mesangial cells at each time poi（*：compared with normal group，P<0.05，△：compared with 24h model group，P<0.0膜细胞凋亡率比较与正常组相比，模型组系膜细胞凋亡率显著升高（P ＜ 0.05），4h 模型组相比，缺氧 48h 模型组系膜细胞凋亡率显著升高（P ＜ -8、图 1-3 和附图 3-1、附图 3-2、附图 3-3、附图 3-4。表-8 两组系膜细胞各时间点凋亡率组别/时间 24 小时 48 小时正常组 5.20％±0.75％ 5.47％±0.58％模型组 11.94％±2.06％*22.20％±4.66％*&

【参考文献】

相关期刊论文 前10条

1 于小函;邸波;;肾小球系膜细胞与糖尿病肾病[J];医学研究杂志;2015年09期

2 毛洪雅;杨洁琼;季永;;JAK2/STAT3调节抗增殖蛋白表达在H_2S后处理心肌细胞中的保护作用[J];中国药理学通报;2014年08期

3 谢敏;周建华;朱国琴;;α-平滑肌肌动蛋白在单侧输尿管梗阻大鼠肾组织中的表达[J];四川医学;2013年08期

4 吴传亮;张许;;缺氧模型的制造与评价[J];社区医学杂志;2013年07期

5 邵明斌;覃远汉;彭单单;周添标;徐会凌;王勇;雷凤英;李正一;;Prohibitin基因转染对肾小管上皮细胞表型转化的影响[J];实用儿科临床杂志;2012年05期

6 龚敏;李树清;;体外培养细胞缺氧模型及特点[J];临床合理用药杂志;2011年01期

7 杨萍;贾钰华;李杰;李丽君;周凤华;;Study of Anti-Myocardial Cell Oxidative Stress Action and Effect of Tanshinone IIA on Prohibitin Expression[J];Journal of Traditional Chinese Medicine;2010年04期

8 杨树栋;廖园莉;何胜东;;Prohibitin对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响[J];现代生物医学进展;2010年15期

9 史雨;黄文彦;徐虹;查锡良;方征宇;;肾病综合征患儿血清抗增殖蛋白水平[J];临床儿科杂志;2010年03期

10 赵艳君;覃远汉;陈静;雷凤英;胡鹏;庞玉生;;Prohibitin在单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化中的表达和作用[J];临床儿科杂志;2010年01期

本文编号：2718923