睾丸热激CIRBP调控ERK和Sam68致生精凋亡的初步研究

发布时间：2020-06-28 02:38

【摘要】：目的:检测CIRBP和Sam68在小鼠睾丸组织和小鼠体外初级精母细胞中的表达变化,并初步探索CIRBP诱导初级精母细胞凋亡的可能作用机制。方法:(1)动物在体实验,将成年雄性ICR小鼠随机分为对照组、热激后3h组和热激后12h组。对照组无任何处理,热激组小鼠模型构建,在水浴锅中给予43℃小鼠阴囊短暂热激处理一次(30min),分别于热激后3h、12h取出其睾丸组织,待进行后续实验;(2)细胞热激实验,将小鼠初级精母细胞GC-2spd分为对照组、热激30min组、热激60min组;对照组无任何干预措施,热激组细胞模型构建,将细胞置于43℃恒温箱中分别孵育30min、60min,继续培养48h后检测相关指标。(3)细胞RNA干扰实验,构建GC-2spd细胞CIRBP基因低表达模型,设定为对照组、10n M-si RNA组、20n M-si RNA组、30n M-si RNA组、50n M-si RNA组,转染后12h、24h和48h,提取细胞样本。q RT-PCR检测CIRBP、Sam68 m RNA的表达变化;Western blot检测CIRBP、Sam68、ERK1/2、p ERK1/2蛋白的表达水平;并运用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测法对GC-2spd细胞进行凋亡水平检测。结果:(1)小鼠睾丸组织热激后3h和12h,发现CIRBP和Sam68的m RNA和蛋白水平在热激后是明显下降的(p0.05),且随着热激后时间的延长,CIRBP的表达是逐渐下降的。(2)小鼠睾丸组织热激后3h和12h,发现ERK1/2蛋白表达没有明显的变化,p-ERK1/2蛋白在热激后是明显降低的,与对照组比较,在热激后12h具有统计学差异(p0.05)。(3)GC-2spd细胞热激30min组和热激60min组,结果显示CIRBP和Sam68的m RNA表达在热激后12h无明显的统计学差异(p0.05);热激后24h,与对照组比较,CIRBP和Sam68的m RNA在热激60min组的表达均有统计学差异(p0.05);热激后48h,与对照组比较,CIRBP和Sam68的m RNA在热激30min组和热激60min组的表达均有统计学差异(p0.05),但组间比较无明显统计学意义(p0.05)。热激后48h,CIRBP和Sam68的蛋白水平在热激30min组和热激60min组的表达均有统计学差异(p0.05),但组间比较无明显统计学意义(p0.05)。(4)在细胞干扰模型中,CIRBP随着si RNA浓度的增加,其m RNA和蛋白的表达是明显降低的(p0.05);Sam68 m RNA的表达仅在转染后48h,si RNA浓度为50n M时具有统计学意义(p0.05),Sam68蛋白在转染后没有明显的变化;ERK1/2蛋白表达几乎没有变化;p ERK1/2蛋白表达水平在转染后呈下降趋势,但仅在转染浓度为50n M组时具有统计学意义(p0.05)。结论:热激后CIRBP可能通过在转录水平对Sam68的表达进行调控,进而调控转录后的基因表达,启动下游机制诱导生精细胞的凋亡。此外,在热激时,CIRBP还可能通过调控ERK1/2的活化与磷酸化,进而可能启动Ras/Raf/MEK/ERK级联信号传导通路,调控生精细胞的凋亡。
【学位授予单位】：华中科技大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2018
【分类号】：R698.2
【图文】：

中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论织和 GC-2spd 细胞中 CIRBP、Sam68 mRNA 的表达IRBP、Sam68 mRNA 的表达见图 1-1。电泳结果显示，CIRBn 在心脏、肝脏、脾脏、肺、肾脏、脑、睾丸、子宫、卵程度的表达。

华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文二、小鼠睾丸组织热激前后 mRNA 和蛋白的表达变化1. PCR 结果① 小鼠睾丸组织 CIRBP、Sam68 及β-actin 基因 PCR 的扩增曲线及溶解曲线如图及图 2-2 所示，qRT-PCR 溶解曲线分析可见 PCR 产物表现为单一、高耸的单峰，未见特异性扩增。

【参考文献】

相关期刊论文 前1条

1 杨琨;张倩;潘阳阳;余四九;何俊峰;崔燕;;冷诱导RNA结合蛋白基因(CIRP)在牦牛睾丸不同发育时期的表达和定位研究[J];农业生物技术学报;2015年09期

本文编号：2732443