DC-CIK细胞治疗晚期肾癌的临床疗效和预后分析及TLR8激动剂VTX-2337对胃癌患者树突细胞的调节作用

发布时间：2020-07-04 23:10

【摘要】：肿瘤的传统治疗方法包括手术治疗、放疗、化疗,根治性手术对大部分早期肿瘤有较好的疗效,但大部分肿瘤早期发病较为隐匿,临床发现已是晚期,失去根治性手术机会,即便手术,依然要面对束后复发的难题。放化疗对抗肿瘤有一定疗效,但由于晚期肿瘤病人全身基础情况较差,很难耐受高剂量的放化疗带来的副作用,这让传统方法束手无策然。随着免疫学的兴起和对肿瘤免疫治疗的研究,人们认识到由于肿瘤微环境和肿瘤细胞的负性调节作用,体内的免疫系统失去平衡,肿瘤细胞处于免疫抑制和逃逸状态,这是肿瘤造成复发转移的根本原因。所以,增强胃癌患者机体免疫系统对肿瘤免疫应答成为对抗胃癌的新突破口。自2010年FDA批准了人类历史上首个利用患者自身树突细胞治疗转移性前列腺癌的肿瘤疫苗sipuleucel-T~([1]),DC疫苗治疗有较为突出的研究成果~([2-4])。现阶段以树突细胞(Dendritic cell,DC)为基础的治疗性肿瘤疫苗DC-CIK是免疫治疗的研究热点~([5])。但此治疗方法目前还处于临床试验阶段所以首先我们要通过临床数据统计分析其安全性及有效性,在安全性的前提下寻找DC的优化策略提高其有效性是发展新一代DC疫苗和提高其临床疗效的关键。故本研究收集72例晚期肾癌DC-CIK细胞治疗的临床试验的实验室数据和随访数据,通过实验室检测指标及回访结果来评估临床疗效和预后。通过分析发现DC-CIK疫苗的安全性尚可,但是有效性还有待提高,这是由于患者自身肿瘤对体内免疫系统的抑制,导致DC发育不完善不能发挥良好的作用有关,TOLL样8(Tolllikereceptors,TLR8)可在DC中表达并通过使NFKB磷酸化促进细胞因子TNF-α、IL-12等释放和DC成熟,增强DC抗原提呈能力~([7]),这些细胞因子可诱导辅助性T细胞(T helper cell,Th)向Th1方向漂移,有利于抑制调节性T细胞(Regulatory cell,Treg)的增殖,从而逆转免疫耐受增强抗肿瘤作用,但TLR8在胃癌患者DC中调节作用还未可知。本研究选择新型高选择性TLR8激动剂VTX-2337刺激胃癌患者DC,检测其对免疫功能的调节作用以及调节后的DC对T淋巴细胞的活化作用,验证了VTX-2337在胃癌患者DC中可促进DC成熟增强其免疫功能,并作为一种佐剂在DC体外诱导T淋巴细胞活化中发挥重要作用。据2014年王品教授~([6])在Science中报道,DC中有一种影响其分化成熟、抗原识别提呈能力的LncRNA,被命名为Lnc-DC,该LncRNA通过直接与胞质中的STAT3结合发挥作用。但在肿瘤患者DC中,这种LncRNA表达量是否正常还未可知最近有研究证明,已有研究证明Lnc-DC调节DC中TLR9/STAT3信号传导,介导HBV的免疫应答。因此推测Lnc-DC与TLR8在胃癌患者DC中是存在协同作用,通过荧光定量PCR检测各组DC中Lnc-DC表达水平。因此本文目的:1.通过临床试验数据统计,做DC-CIK治疗晚期肾癌的临床疗效和预后分析,验证DC-CIK细胞治疗的安全性;2.探索TLR8激动剂VTX-2337对胃癌病人DC体外培养的调节作用;3.Lnc-DC在正常人和胃癌患者DC中以及激动剂组和对照组中表达量是否存在差异;方法:1.统计参加DC-CIK临床试验的晚期肾癌患者相关检验数据,用SPSS16.0进行分析,整理并回访患者的生存期做预后分析。2.TLR8激动剂VTX-2337对胃癌患者树突细胞的调节作用以及相关信号通路的研究(1)TLR8激动剂对胃癌患者DC进行刺激;(2)Western blot检测DC中NF-κB、pNF-κB蛋白水平用以证实TLR8激动剂发挥作用;(3)流式检测DC表面成熟标志分子(HLA-DR、CD11C、CD80、CD86、CD54、CD83);(4)ELISA检测培养上清细胞因子IL-12、TNF-α的表达水平;(5)DC-T淋巴细胞共培养,流式检测T细胞表面活化标志(HLA-DRCD3、CD28)。(6)qPCR检测正常人与胃癌患者DC中以及激动剂组与对照组中lnc-DC的含量并进行比较;结果:第一部分研究结果:1.72例肾癌患者经DC-CIK细胞免疫治疗后,数据不全及失访30例,剩余42例客观反应率为33.33%,疾病控制率为73.81%;1年生存率为83%,2年生存率为78%,3年生存率维持在67.8%。2.外周血CD3+CD8+细胞比例显著升高(P=0.009),CD4~+CD25~+细胞、CD3~+CD4~+细胞、CD4~+CD8~+比例明显下降(P=0.026,P=0.028,P=0.04)。3.与治疗前相比,甘油三酯水平升高(P=0.003),Pearson相关性分析显示晚期肾癌患者血清甘油三酯与B细胞比例呈正相关(r=0.387,P=0.011)高密度胆固醇与NK细胞比例呈正相关(r=0.362,P=0.018),高密度胆固醇与调节性T细胞比例呈负相关(r=-0.303,P=0.049)4单因素分析显示TNM分期、细胞治疗次数、治疗前KPS评分为DC-CIK治疗肾癌预后的影响因素(P0.05);多因素分析显示TNM分期是独立预后因素。第二部分研究结果:1.与对照组相比较,TLR8激动剂VTX-2337作用后,胃癌患者的DC中pNF-κB蛋白表达水平升高。2.DC表面成熟标志分子HLA-DR、CD11C、CD80、CD86、CD54、CD83表达上调。3.实验组培养上清细胞因子IL-12、TNF-α的表达高于对照组。4.DC-T淋巴细胞共培养,实验组T细胞表面活化标志HLA-DRCD3、CD28表达无显著差异。5.正常人DC中Lnc-DC表达量高于胃癌患者(P0.05)。激动剂组Lnc-DC表达量与对照组相比无显著差异。
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R737.11;R735.2

【参考文献】