αKlotho抑制Caspase-1介导的细胞焦亡在糖尿病肾小管上皮细胞损伤中的作用

发布时间：2020-07-15 19:28

【摘要】：目的:观察细胞焦亡指标和αKlotho在糖尿病肾病大鼠模型以及高糖诱导肾小管上皮细胞损伤模型中的改变,探讨αKlotho以及Caspase-1介导的细胞焦亡与糖尿病肾小管上皮细胞损伤之间的关系。方法:(1)体内实验:30只SD大鼠分为模型组(n=20)和对照组(n=10),高脂饮食后小剂量链脲佐菌素(STZ)注射建立糖尿病肾病模型,于造模成功后第12周收集大鼠的血液及肾组织。记录体重和血糖变化,血清生化分析检查肾功能和血脂变化,HE和Masson染色观察肾脏光镜改变,电镜观察肾组织超微结构。Western Blotting检测αKlotho、Csapase-1的蛋白表达水平,RT-qPCR检测αKlotho、Csapase-1的mRNA水平。(2)体外实验:体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)分为对照组(control,Con48h组)、高渗组(hyper osmosis,HO48h组)、高糖组(high glucose,HG1h、HG6h、HG24h、HG48h组)、αKlotho加高糖组(high glucose/αKlotho,HG/K 0pM、HG/K 100pM、HG/K 200pM、HG/K 400pM组)。可见分光光度法检测细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,Western Blotting检测αKlotho、Csapase-1、GSDMD的蛋白表达水平,RT-qPCR检测αKlotho、Csapase-1、GSDMD、IL-1β的mRNA水平,ELISA法检测细胞培养上清液以及细胞裂解液中IL-1β浓度。结果:(1)体内实验:成功建立糖尿病肾病大鼠模型,病理可见肾小球仅轻度肥大,肾小管上皮细胞肿胀、空泡变性,肾间质炎症细胞浸润。模型大鼠肾组织αKlotho表达下降,Caspase-1表达升高,与对照组相比,差异有统计学意义(p0.05)。(2)体外实验:高糖作用后细胞培养液中LDH活性逐渐升高,48h活性达高峰(p0.001);细胞焦亡指标Caspase-1在高糖刺激后逐渐升高,48h表达量达高峰(p0.05);与Con48h组相比,HG48h组Caspase-1、IL-1β表达量升高(p0.05),GSDMD的mRNA表达量升高(p0.01),但蛋白水平未见统计学差异(p=0.234);αKlotho表达量降低(p0.05);外源性补充αKlotho,随着作用浓度的升高,肾小管上皮细胞Caspase-1、IL-1β以及LDH活性逐渐下降(p0.05),在浓度为200pmol/L时,抑制作用最强。结论:αKlotho抑制Caspase-1介导的细胞焦亡,减轻糖尿病肾小管上皮细胞损伤。
【学位授予单位】：川北医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2019
【分类号】：R587.2;R692.9
【图文】：

体重,大鼠,对照组,高脂饮食

果糖尿病大鼠的一般情况体重的变化SD 大鼠高脂饮食 8 周后，腹腔注射小剂量 STZ，20 只大成模率为 60%。模型成功后第 12 周，对照组 2 只大鼠死亡大鼠死亡。0 周时模型组体重高于对照组，差异有统0.004）；12 周时模型组体重低于对照组，差异有统0.001）。模型组大鼠 12 周时与 0 周时相比，体重明显降低学意义（p<0.001）。

空腹血糖,大鼠,血糖,血生化

21图 2 大鼠血糖变化on：对照组，Mod：模型组，F：空腹血糖，R：随机血糖，2h：禁食两小时后血糖，d天数，数据以均数和标准差表示。圆点表示为模型组每只大鼠的空腹血糖值，三角形每只大鼠空腹血糖值，菱形表示模型组每只大鼠随机或者禁食 2h 后血糖值。生化指标的改变模型成功后第 12 周时处死大鼠，血生化结果显示对照组和模型平无统计学差异（p=0.265），尿素氮水平模型组高于对

光镜,固醇,生化指标,肌酐

低于对照组（p=0.251）。表 1 大鼠血清生化指标的改变指标对照组模型组 P 值肌酐（μmol/L） 38.25±1.40 32.85±4.30 0.26素氮（mmol/L） 7.37±0.41 16.68±1.16 <0.00固醇（mmol/L） 1.53±0.05 1.32±0.15 0.21油三酯（mmol/L） 0.41±0.04 0.36±0.26 0.25糖尿病大鼠肾脏病理改变光镜改变模型组大鼠局部可见肾小球轻度肥大，肾小管上皮细胞空泡变质炎症细胞浸润。

【相似文献】