MIR-92a，MIR-100及MIR-143在膀胱癌患者血清的表达及临床意义

发布时间：2020-09-08 12:58

　　 目的探讨MIR(微小RNA)-92a,MIR-100及MIR-143的表达水平对膀胱癌的诊断价值。方法收集我院2016年10月~2017年4月期间,50例临床及病理诊断为膀胱癌的患者的血清及50例健康受试者的血清,通过从膀胱癌患者或健康受试人群的肘正中静脉抽取10mL血,存放入含有乙二胺四乙酸二钠的试管中,随后将其置于离心机中,离心3000rpm,4℃,离心10min,然后再置入离心机中,5000rpm,4℃,离心5min。离心结束后,迅速取上清液移至冻存管内,在冻存管上写好编号及日期,盖好管帽,置入冻存盒中,冰箱过夜(-80℃),第二天将其移入到液氮罐中保存备用。我们只选用非溶解性红细胞的血液样本,因为溶解性的红细胞容易影响MIRNA的水平。溶解性的红细胞通过541nm的光谱探测检测出。接着取出提取的血清(拧紧),立即放入37.0℃的水浴箱中,1min后从中取血清样本,利用Trizol法提取血清中的提取总RNA,并用提取的MIRNA取5ul利用MIRNA反转录试剂盒进行反转录。反应的条件为:16℃30 min、42℃30min、85℃5 min。当MIRNA反转录完成后,取5ul利用RT-qPCR将其进行扩增。取25ul样本液应用SYBR Green PCR试剂盒将放入周围温度为95℃的环境中15min,接着放入94℃15s,55℃30s,70℃34s进行40个循环,然后在70℃环境中进行MIRNA实时定量PCR检测。以U6作为内参,根据系统生成的样本拷贝数,通过应用RT-qPCR(实时定量反转录聚合酶链反应)检测血清中MIR-92a,MIR-100及MIR-143的表达水平,并应用ROC曲线(受试者工作特征曲线)计算MIR-92a,MIR-100及MIR-143的临界值,同时利用所得到的临界值单独或联合检测血清样本中MIR-92a,MIR-100及MIR-143的相对表达水平,计算其灵敏度及特异度。结果(1)MIRNA的相对表达水平膀胱癌患者的血清中MIR-92a,MIR-100及MIR-143的相对表达水平相对于健康人群组(50人)明显降低,而且MIR-143的相对表达水平在MIBC(35人)与NMIBC(15人)中有显著的不同(各组数据均有统计学意义,P0.05)。(2)血清中MIR-92a,MIR-100及MIR-143的相对表达水平对膀胱癌的诊断价值:通过单独检测分析发现MIR-92a的灵敏度为96.0%,特异度为74.0%;MIR-100的灵敏度为86.0%,特异度为65.0%;MIR-143的灵敏度为74.0%,特异度为90.0%;MIR-100和MIR-92a组合的灵敏度为88.0%,特异度为82.0%;MIR-92a和MIR-143组合的灵敏度为92.0%,特异度为92.0%;MIR-143和MIR-100组合的灵敏度为86.0%,特异度为82.0%。(3)MIR-92a与MIR-143组合在诊断膀胱癌中具有较好的诊断价值,可以作为血清检测膀胱癌的潜在标记物。结论(1)与健康人群的MIR-92a,MIR-100及MIR-143相对表达水平比较,在膀胱癌患者中三种MIRNAs的表达水平是明显降低的,而且血清中MIR-143的相对表达水平可以作为膀胱癌患者中区别MIBC与NMIBC的初步诊断指标(P0.05)。(2)通过本实验可以看出MIR-92a,MIR-100及MIR-143可以作为初步诊断膀胱癌的潜在标记物。(3)应用ROC曲线(受试者工作特征曲线)分析了单独的MIR-92a,MIR-100、MIR-143以及两者或三者组合联合检测对膀胱癌诊断的价值。根据结果显示两者组合中MIR-92a与MIR-143组合的灵敏度及特异度最高,MIR-92a和MIR-143组合的灵敏度为92.0%,特异度为92.0%;与三者组合相比MIR-92a与MIR-143组合无明显差异。(4)MIR-92a与MIR-143组合在诊断膀胱癌中具有较好的诊断价值,可以作为血清检测膀胱癌的潜在标记物。
【学位单位】：河北北方学院
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2018
【中图分类】：R737.14
【部分图文】：

1总RNA琼脂糖凝胶电泳紫外成像 Total RNAagarose gel electrophoresis u下依次为 5S、18S、28S; 5S 隐约可见，而 2的亮度约为 18S 条带的两倍，由此可知总 R其完整性较好 is faintly visible and 28S and 18S bands are o bands is about twice as bright as the band of 1s no obvious degradation and its integrity is be

【参考文献】

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本文编号：2814210