替米沙坦对单纯性肥胖小鼠血清脂联素、尿微量白蛋白及肾脏病理的作用

发布时间：2017-04-08 01:12

  本文关键词：替米沙坦对单纯性肥胖小鼠血清脂联素、尿微量白蛋白及肾脏病理的作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究目的肥胖目前是全球共存的一个严重的公共卫生问题。近年来肥胖的发病率大幅度增长,预测表明,2030年全球人口将有58%为超重或是肥胖。超重及肥胖可增加2型糖尿病、高血压、心血管疾病及肾脏疾病发生的风险。Weisinger早在1974年就已提出肥胖可导致蛋白尿的产生,即肥胖相关性肾病(obesity-related glomerulopathy,ORG)。已有多项研究证实,肥胖导致尿微量白蛋白(urinary microalbumin,m ALB)排泄增多与血清脂联素(adiponectin,ADP)水平下降有关,给予过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator activated receptor gamma,PPARγ)激动剂吡格列酮干预后,血清ADP水平升高,尿m ALB排泄减少。替米沙坦结构与吡格列酮类似,多项研究证实替米沙坦也具有PPARγ激活作用,可提高血清ADP水平。本研究针对替米沙坦的PPARγ激活作用对单纯性肥胖小鼠血清ADP、尿m ALB排泄、肾脏PPARγm RNA表达水平、肾脏足细胞紧密连接蛋白-1(zonula occludens-1,ZO-1)表达水平及肾脏病理改变的影响,探讨替米沙坦作为PPARγ激动剂于ORG治疗的意义。研究方法8周龄雄性ob/ob小鼠24只和其同系C57BL/6J小鼠8只,适应性饲养1周,测量小鼠体质量。ob/ob肥胖小鼠按其体质量分层随机分为三组:模型组(M组,n=8)、替米沙坦治疗组(T1组,n=8)、氯沙坦治疗组(T2组,n=8);C57BL/6J小鼠为对照组(C组,n=8)。T1组给予替米沙坦5mg·kg-1·d-1灌胃,T2组给予氯沙坦5mg·kg-1·d-1灌胃,C组、M组小鼠予以等量蒸馏水灌胃。每周一早上8:00测定各组小鼠体质量,根据小鼠体质量调整给药剂量,上述步骤连续12周。实验前后分别采集各组小鼠血液及24h尿液标本,测定小鼠血糖、血清ADP及24h尿m ALB。实验结束12周末处死小鼠,摘取小鼠两侧肾脏并称重。一侧肾脏置于无菌冻存管于液氮中保存,实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,q-PCR)测定肾脏PPARγm RNA表达水平;另侧肾脏用10%中性甲醛固定,石蜡包埋切片,HE染色后于光镜下观察肾组织病理改变,取10个正切的肾小球切面,测量肾小球直径并取平均值;免疫组化方法检测肾脏ZO-1表达水平。比较四组小鼠体质量、血清ADP、24h尿m ALB、肾脏PPARγm RNA表达水平、肾脏湿重、肾小球直径及肾脏ZO-1表达水平的差异,并将血清ADP、24h尿m ALB、肾脏PPARγm RNA表达水平、肾脏ZO-1表达水平与其他指标行相关性分析。使用SPSS 20.0软件行数据处理及分析,P0.05为有统计学意义。实验结果1.小鼠一般情况1.1实验前ob/ob小鼠及C57BL/6J小鼠体质量、24h尿m ALB及血糖比较:实验开始前ob/ob小鼠平均体质量显著高于同系同周龄C57BL/6J小鼠(P0.01),且ob/ob小鼠平均体质量超过C57BL/6J小鼠平均体质量的20%,达到小鼠肥胖标准。ob/ob小鼠24h尿m ALB明显高于C57BL/6J小鼠(P0.01)。ob/ob小鼠及C57BL/6J小鼠血糖水平存在差异(P0.01),但实验前后ob/ob小鼠血糖均16.7mmol/L,排除小鼠糖尿病诊断,故可排除糖尿病所致的肥胖小鼠尿m ALB增多,明确肥胖小鼠尿m ALB由肥胖所致。1.2实验前后各组小鼠体质量比较:实验前M组、T1组及T2组小鼠体质量均超过C组小鼠体质量(P0.01);M组、T1组及T2组小鼠体质量无显著性差异(P0.05)。实验后M组、T1组及T2组小鼠体质量均明显超过C组小鼠体质量(P0.01);T1组小鼠体质量低于M组及T2组(P0.01)。M组及T2组小鼠体质量无明显差异(P0.05)。2.24小时尿微量白蛋白:2.1各组实验前后比较:实验后M组小鼠24h尿m ALB较实验前增加(P0.01);实验后T1、T2组小鼠24h尿m ALB较实验前减少(P0.01);C组小鼠24h尿m ALB较实验前后无变化(P0.05)。2.2各组小鼠之间比较:实验前后M组、T1组及T2组小鼠24h尿m ALB均明显高于C组(P0.01);实验后T1组、T2组小鼠24h尿m ALB明显低于M组小鼠(P0.01,P=0.01);T1组小鼠24h尿m ALB明显低于T2组小鼠24h尿m ALB(P=0.027)。3.血清脂联素3.1各组实验前后比较:实验后M组、T2组小鼠血清ADP水平较实验前明显降低(P0.01);实验后T1组小鼠血清ADP水平明显高于实验前(P0.01);C组小鼠血清ADP水平无明显变化(P0.05)。3.2各组小鼠之间比较:实验前后M组、T1组及T2组小鼠血清ADP水平均明显低于C组(P0.01);实验前M组、T1组及T2组小鼠血清ADP水平无明显差异(P=0.174、P=0.183、P=0.973);实验后T1组小鼠血清ADP水平高于M组小鼠及T2组小鼠(P=0.003、P=0.005);实验后M组、T2组血清ADP水平差异无统计学意义(P=0.862)。4.肾脏PPARγm RNA表达水平:M组、T1组、T2组小鼠PPARγm RNA表达水平均低于C组(P0.01);T1组小鼠肾脏PPARγm RNA表达水平高于M组小鼠(P=0.026);T1组小鼠肾脏PPARγm RNA表达水平高于T2组小鼠(P=0.035);T2组小鼠肾脏PPARγm RNA表达水平与M组小鼠差异无统计学意义(P=0.886)。5.肾脏病理改变5.1肾脏湿重(右肾):C组小鼠肾脏湿重低于M组小鼠、T2组小鼠肾脏(P0.01);M组小鼠肾脏湿重高于T1组小鼠肾脏(P=0.005),与T2组小鼠肾脏湿重无明显差异(P=0.377)。T1组小鼠肾脏湿重低于T2组小鼠肾脏(P=0.04)。5.2肾脏组织病理改变:光镜下C组小鼠肾脏病理结果提示其肾小球、肾小管、内皮细胞及系膜细胞均正常;M组、T2组小鼠肾脏病理提示肾小球细胞数目明显增加、肾小球肥大、体积增大,肾小球基底膜明显增厚;系膜区明显增宽,并可见系膜细胞及基质增生,部分伴有局灶节段性肾小球硬化及间质纤维化。T1组小鼠肾脏病理提示肾小球内皮细胞、系膜细胞基本正常,肾小球硬化程度较M组及T2组小鼠轻。5.3肾小球直径:M组、T2组小鼠肾小球直径明显大于C组、T1组小鼠肾小球直径(P0.01);T1组小鼠肾小球直径小于T2组小鼠肾小球直径(P0.01);T2组小鼠肾小与M组小鼠肾小球直径无明显差异(P=0.945)。6.肾脏ZO-1表达水平:M组及T2组小鼠肾脏ZO-1表达水平低于C组小鼠肾脏ZO-1表达水平(P0.01);T1组小鼠肾脏ZO-1表达水平低于C组小鼠肾脏ZO-1表达水平(P=0.079);M组及T2组小鼠肾脏ZO-1表达水平低于T1组小鼠肾脏ZO-1表达水平(P0.01)。7.相关性分析:7.1小鼠24h尿mALB与体质量、右侧肾脏湿重及肾小球直径呈正相(r1=0.853、r2=0.631、r3=0.830;P10.01、P20.01、P30.01),与血清ADP水平、肾脏PPARγm RNA表达水平及肾脏ZO-1表达水平呈负相关(r4=-0.773、r5=-0.469、r6=-0.731;P40.01、P5=0.007、P60.01)。7.2小鼠血清ADP水平与肾脏PPARγm RNA与ZO-1表达水平呈正相(r7=0.434、r8=0.811;P7=0.013、P80.01),与小鼠体质量、右侧肾脏湿重、24h尿m ALB及肾小球直径呈负相关(r9=-0.743、r10=-0.523、r4=-0.773、r11=-0.722;P90.01、P10=0.002、P40.01、P110.01)。7.3小鼠肾脏PPARγm RNA表达水平与血清ADP水平、肾脏ZO-1表达水平呈正相关(r7=0.434、r12=0.386;P7=0.013、P12=0.029),与小鼠体质量、右侧肾脏湿重、24h尿m ALB及肾小球直径呈负相关(r13=-0.381、r14=-0.340、r5=-0.469、r15=-0.547;P13=0.034、P14=0.047、P5=0.007、P15=0.001)。7.4小鼠肾脏ZO-1表达水平与血清ADP水平、肾脏PPARγm RNA表达水平呈正相关(r8=0.811、r12=0.386;P80.01、P12=0.029),与小鼠体质量、右侧肾脏湿重、24h尿m ALB及肾小球直径呈负相关(r16=-0.770、r17=-0.493、r6=-0.731、r18=-0.787;P160.01、P17=0.004、P60.01、P180.01)。实验结论1、肥胖小鼠24h尿m ALB排泄量增加、血清ADP水平下降、肾脏PPARγm RNA及肾脏ZO-1表达水平下降;肾脏病理提示肾小球体积增大部分伴有局灶节段硬化。2、替米沙坦及氯沙坦可通过改善肾脏血流动力学及非血流动力学效应减少单纯性肥胖小鼠24h尿m ALB排泄量。3、替米沙坦通过其特殊的PPARγ激活作用,提高单纯性肥胖小鼠血清ADP水平、肾小球足细胞ZO-1表达增加并抑制肾小球肥大、减少24h尿m ALB排泄,使其较其他ARB类药物于单纯性肥胖小鼠肾脏有更强的保护作用。
【关键词】：替米沙坦 肥胖相关性肾病 过氧化物酶体增殖物受体 γ 脂联素 尿微量白蛋白 紧密连接蛋白-1
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R589.2;R692
【目录】：

• 中文摘要4-8
• Abstract8-14
• 缩略语/符号说明14-16
• 前言16-18
• 研究现状、成果16-17
• 研究目的、方法17-18
• 对象和方法18-31
• 结果31-44
• 讨论44-50
• 结论50-51
• 参考文献51-56
• 发表论文和参加科研情况说明56-57
• 综述 ARB在慢性肾脏病中应用57-67
• 综述参考文献63-67
• 致谢67-68
• 个人简历68

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本文编号：291745