挤压综合征相关急性肾损伤大鼠Th17/Treg细胞失衡及乌司他丁干预作用研究
发布时间：2020-12-17 00:56
目的:基于课题组前期的工作,建立挤压综合征相关急性肾损伤大鼠模型,验证乌司他丁对挤压综合征相关急性肾损伤大鼠体内Th17/Treg细胞的调节作用,旨在为挤压综合征相关急性肾损伤的致病机制提供新的思路,为其干预治疗寻找新的靶点。方法:将46只雄性Wistar大鼠随机分为5组:正常对照组（n=6）,CSAKI模型组（n=10）,CSAKI+UTI1组（50,000U/kg）（n=10）,CSAKI+UTI2组（100,000U/kg）（n=10）和CSAKI+UTI3（200,000U/kg）（n=10）。CSAKI模型组和CSAKI+UTI组动物称重后用2%戊巴比妥钠（3mL/kg）腹腔注射麻醉,然后置于俯卧位,用我们自主研发的新一代数字挤压平台（精确设定挤压重量）建立挤压综合征相关急性肾损伤大鼠模型,双下肢挤压24小时,压力是大鼠体重的10倍。当达到指定的压力和时间后,在CSAKI+UTI1,UTI2,UTI3组大鼠中分别通过尾静脉给予50,000U/kg,100,000U/kg和200,000U/kg乌司他丁。观察24小时后,将CSAKI模型组、UTI治疗组和正常对照组大鼠分别麻醉后...
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：44 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
血生化指标变化
图 2 肌肉和肾组织的苏木精和伊红染色的代表性图像注：HE 染色（×200）结果（标尺为 100μm） 正常对照组（A,F），CSAKI 组（B,G），CSAKI+UTI1 组（C,H）,CSAKI+UTI3 组（D,I）,CSAKI+UTI3 组（E,J）。1.2.3 细胞因子 IL-17，IL-6，IL-10 和 TGF-β1 水平的变化为了进一步了解炎性生物标志物的变化，收集血清样品并如上所述通过 ELISA重复测定三次。各组中 Th17 和 Treg 细胞相关细胞因子的表达水平如图 3 所示。与正常对照组相比，CSAKI 组 Th17 细胞相关细胞因子（IL-6 和 IL-17）的水平显著高于正常对照组。（图 3A，B; P <0.01），这两种细胞因子都参与促进炎症的发生发展。而用乌司他丁治疗后可降低 CSAKI 组大鼠体内 IL-6 和 IL-17 的水平（P <0.05）。 IL-10 和 TGF-β1 是 Treg 相关的细胞因子，其特征在于免疫抑制。与正常对照组相比，CSAKI 组大鼠体内 IL-10 水平显著升高（图 3C; P <0.01），而 TGF-β1 水平显著降低（图 3D; P <0.01）。用乌司他丁治疗后（100,000U/kg和 200,000U/kg）的 CSAKI 大鼠体内 TGF-β1 的血清浓度显著增加，但血清 IL-10水平并没有显著变化。此外，在肾组织中，Th17 相关细胞因子（IL-6 和 IL-17）
图 3 血清和肾组织中 IL-6，IL-17，IL-10 和 TGF-β1 的水平变化注：A 血清 IL-6 水平; B 血清 IL-17 水平; C 血清 IL-10 水平; D 血清 TGF-β1 水平; E 肾组织中 IL-6 水平; F 肾组织中 IL-17 水平; G 肾组织中的 IL-10 水平; H 肾组织中的 TGF-β1 水平。与对照组相比，＆P <0.05; &&P <0.01。与 CSAKI 组相比* P <0.05; **P <0.01。1.2.4 流式细胞术分析 Treg 细胞和 Th17 细胞的比例为了评估乌司他丁对 CD4+T 细胞的影响，收集外周血样品用于流式细胞分析。如图 4 所示，门控 CD4+T 细胞（图 4M）。对于 Th17 细胞分析，与正常对照组相比，CSAKI 组大鼠外周血中 Th17 细胞的百分比显著增加（P <0.01）。与 CSAKI组大鼠相比，用乌司他丁治疗后 Th17 细胞百分比显著降低（P <0.01）（图 4A-E，K）。与正常对照组相比，CSAKI 组大鼠外周血中 Treg 细胞的比例显著降低（P<0.05）。与 CSAKI 组相比，乌司他丁治疗组的 CD4+T 细胞表现出显著的 Treg细胞百分比增加（图 4F-J，L）。
本文编号：2921110
【文章来源】：天津医科大学天津市 211工程院校
【文章页数】：44 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
血生化指标变化
图 2 肌肉和肾组织的苏木精和伊红染色的代表性图像注：HE 染色（×200）结果（标尺为 100μm） 正常对照组（A,F），CSAKI 组（B,G），CSAKI+UTI1 组（C,H）,CSAKI+UTI3 组（D,I）,CSAKI+UTI3 组（E,J）。1.2.3 细胞因子 IL-17，IL-6，IL-10 和 TGF-β1 水平的变化为了进一步了解炎性生物标志物的变化，收集血清样品并如上所述通过 ELISA重复测定三次。各组中 Th17 和 Treg 细胞相关细胞因子的表达水平如图 3 所示。与正常对照组相比，CSAKI 组 Th17 细胞相关细胞因子（IL-6 和 IL-17）的水平显著高于正常对照组。（图 3A，B; P <0.01），这两种细胞因子都参与促进炎症的发生发展。而用乌司他丁治疗后可降低 CSAKI 组大鼠体内 IL-6 和 IL-17 的水平（P <0.05）。 IL-10 和 TGF-β1 是 Treg 相关的细胞因子，其特征在于免疫抑制。与正常对照组相比，CSAKI 组大鼠体内 IL-10 水平显著升高（图 3C; P <0.01），而 TGF-β1 水平显著降低（图 3D; P <0.01）。用乌司他丁治疗后（100,000U/kg和 200,000U/kg）的 CSAKI 大鼠体内 TGF-β1 的血清浓度显著增加，但血清 IL-10水平并没有显著变化。此外，在肾组织中，Th17 相关细胞因子（IL-6 和 IL-17）
图 3 血清和肾组织中 IL-6，IL-17，IL-10 和 TGF-β1 的水平变化注：A 血清 IL-6 水平; B 血清 IL-17 水平; C 血清 IL-10 水平; D 血清 TGF-β1 水平; E 肾组织中 IL-6 水平; F 肾组织中 IL-17 水平; G 肾组织中的 IL-10 水平; H 肾组织中的 TGF-β1 水平。与对照组相比，＆P <0.05; &&P <0.01。与 CSAKI 组相比* P <0.05; **P <0.01。1.2.4 流式细胞术分析 Treg 细胞和 Th17 细胞的比例为了评估乌司他丁对 CD4+T 细胞的影响，收集外周血样品用于流式细胞分析。如图 4 所示，门控 CD4+T 细胞（图 4M）。对于 Th17 细胞分析，与正常对照组相比，CSAKI 组大鼠外周血中 Th17 细胞的百分比显著增加（P <0.01）。与 CSAKI组大鼠相比，用乌司他丁治疗后 Th17 细胞百分比显著降低（P <0.01）（图 4A-E，K）。与正常对照组相比，CSAKI 组大鼠外周血中 Treg 细胞的比例显著降低（P<0.05）。与 CSAKI 组相比，乌司他丁治疗组的 CD4+T 细胞表现出显著的 Treg细胞百分比增加（图 4F-J，L）。
本文编号：2921110
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