BPEI/miRNA、PAMAM/miRNA和PEI/miRNA治疗前列腺癌作用研究
发布时间：2020-12-27 08:57
目的利用分枝状聚乙烯亚胺（BPEI）、树枝状聚合物聚酰胺-胺（PAMAM）和线型的聚乙烯亚胺（LPEI）包载具有抑制前列腺癌细胞LNCa P增殖、侵袭和转移的miRNA-15a和miRNA-16-1构建3种聚阳离子纳米复合物,对其抑制LNCa P细胞作用进行考察。方法利用粒径分析仪测定3种纳米复合物的粒径Zeta电位,利用凝胶电泳实验测定载体材料包裹miRNA的稳定性;利用荧光显微镜和流式细胞仪考察3种复合物对LNCa P细胞的转染效率;CCK8法测定抑制LNCa P细胞增殖效果;Western blot法测定BCL-2、Cyclin D1和Wnt3a蛋白表达效果。结果分枝状聚乙烯亚胺,树枝状聚合物聚酰胺-胺和线型的聚乙烯亚胺3种材料包裹miRNA可形成稳定的纳米复合物,在N/P=5时,分枝状聚乙烯亚胺/miRNA-CY3对LNCa P的转染效率高于树枝状聚合物聚酰胺-胺/miRNA-CY3和线型的聚乙烯亚胺/miRNA-CY3,具有统计学意义（P<0.01）。分枝状聚乙烯亚胺、树枝状聚合物聚酰胺-胺和线型的聚乙烯亚胺都可以携带miRNA-15a和miRNA-16-1进入LNCa...
【文章来源】：中国药学杂志. 2015年09期 北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
不同N/P比3种复合物粒径．n=3，x珋±sBPEI/miＲNA与PAMAM/miＲNA相比，1)
Bcl-2、CyclinD1和Wnt3a抗体的稀释度为1∶200;β-actin的稀释度为1∶5000)4℃过夜;加入相对应的HＲP标记的二抗(均为1∶2000稀释)室温下孵育2h;0.1%TritonX-100/PBS于室温摇床洗膜3次，每次15min。PVDF膜经ECL液处理后压片、曝光、显影、定影。1.9统计学处理统计学处理数据用Mean±SD表示，组间比较采用ANOVA方差分析，P＜0.05则认为存在显著性差异。涉及统计学分析，均采用SPSS18.0软件完成。2结果2.1不同N/P比下复合物粒径和Zeta电位3种复合物粒径随着N/P比的增大而降低(图1)，Zeta电位随着N/P比的增大而增加(图2)，说明随着N/P比的增大，载体所带电荷增加，使得复合物包裹更加紧密。当N/P比为5时，PAMAM/miＲ粒径分别与BPEI/miＲ和LEI/miＲ有显著性差异(P＜0.01)。可能是由于PAMAM所带电荷少于BPEI和LPEI，造成包裹miＲNA能力较弱，故形成的复合物粒径也较大。2.2不同复合物凝胶阻滞电泳复合物凝胶电泳阻滞分析可以看出(图3)，3种复合物的N/P值在1时，miＲNA不能被3种材料包裹，可随着电场进行迁移，与核酸探针结合后，在紫外线照射下，可以看到清晰的条带。当3种复合物的N/P值在5时，miＲNA可以完全被包裹，阻止其在电场中的迁移;同时，由于miＲNA可以被完全包裹，不能被与核酸探针结合，故在紫外线照射的情况下，未见条带显出。图1不同N/P比3种复合物粒径．n=3，x珋±sBPEI/miＲNA与PAMAM/miＲNA相比，1)P＜0.01;LPEI/miＲNA与PAMAM/miＲNA相比，2)P＜0.01Fig.1SizesofB/miＲ，P/miＲandL/miＲcomplexesatvari-ousN/Pratios．n=3，x珋±s1)P＜0.01，BPEI/miＲNAvsPAMAM/miＲNA;2)P＜0.01，LPEI/miＲNAvsPAMAM/miＲNA图2不同N/P比3种复合物Zeta电位．n=3，x珋±sFig.2ZetapotentialsofB/miＲ，P
治觯琍＜0.05则认为存在显著性差异。涉及统计学分析，均采用SPSS18.0软件完成。2结果2.1不同N/P比下复合物粒径和Zeta电位3种复合物粒径随着N/P比的增大而降低(图1)，Zeta电位随着N/P比的增大而增加(图2)，说明随着N/P比的增大，载体所带电荷增加，使得复合物包裹更加紧密。当N/P比为5时，PAMAM/miＲ粒径分别与BPEI/miＲ和LEI/miＲ有显著性差异(P＜0.01)。可能是由于PAMAM所带电荷少于BPEI和LPEI，造成包裹miＲNA能力较弱，故形成的复合物粒径也较大。2.2不同复合物凝胶阻滞电泳复合物凝胶电泳阻滞分析可以看出(图3)，3种复合物的N/P值在1时，miＲNA不能被3种材料包裹，可随着电场进行迁移，与核酸探针结合后，在紫外线照射下，可以看到清晰的条带。当3种复合物的N/P值在5时，miＲNA可以完全被包裹，阻止其在电场中的迁移;同时，由于miＲNA可以被完全包裹，不能被与核酸探针结合，故在紫外线照射的情况下，未见条带显出。图1不同N/P比3种复合物粒径．n=3，x珋±sBPEI/miＲNA与PAMAM/miＲNA相比，1)P＜0.01;LPEI/miＲNA与PAMAM/miＲNA相比，2)P＜0.01Fig.1SizesofB/miＲ，P/miＲandL/miＲcomplexesatvari-ousN/Pratios．n=3，x珋±s1)P＜0.01，BPEI/miＲNAvsPAMAM/miＲNA;2)P＜0.01，LPEI/miＲNAvsPAMAM/miＲNA图2不同N/P比3种复合物Zeta电位．n=3，x珋±sFig.2ZetapotentialsofB/miＲ，P/miＲandL/miＲcomplexesatvariousN/Pratios．n=3，x珋±s图3不同N/P比3种复合物凝胶阻滞电泳分析结果1，4，7－BPEI/miＲNA;2，5，8－PAMAM/miＲNA;3，6，9－LPEI/miＲNA.1，2，3－N/P=1;4，5，6－N/P=5;7，8，9－N/P=10Fig.3ＲesultsofagarosegelelectrophoresisofcomplexesatvariousN/Pratios1，4，7－BPEI/mi?
【参考文献】：
期刊论文
[1]YPSMA-1单克隆抗体修饰的树突状高分子前列腺癌靶向基因递送载体[J]. 武鑫,蔡溱,朱全刚,王翔,王晓宇,叶丽华,刘继勇,丁雪鹰,高静,高申. 中国药学杂志. 2012(06)
本文编号：2941461
【文章来源】：中国药学杂志. 2015年09期 北大核心
【文章页数】：7 页
【部分图文】：
不同N/P比3种复合物粒径．n=3，x珋±sBPEI/miＲNA与PAMAM/miＲNA相比，1)
Bcl-2、CyclinD1和Wnt3a抗体的稀释度为1∶200;β-actin的稀释度为1∶5000)4℃过夜;加入相对应的HＲP标记的二抗(均为1∶2000稀释)室温下孵育2h;0.1%TritonX-100/PBS于室温摇床洗膜3次，每次15min。PVDF膜经ECL液处理后压片、曝光、显影、定影。1.9统计学处理统计学处理数据用Mean±SD表示，组间比较采用ANOVA方差分析，P＜0.05则认为存在显著性差异。涉及统计学分析，均采用SPSS18.0软件完成。2结果2.1不同N/P比下复合物粒径和Zeta电位3种复合物粒径随着N/P比的增大而降低(图1)，Zeta电位随着N/P比的增大而增加(图2)，说明随着N/P比的增大，载体所带电荷增加，使得复合物包裹更加紧密。当N/P比为5时，PAMAM/miＲ粒径分别与BPEI/miＲ和LEI/miＲ有显著性差异(P＜0.01)。可能是由于PAMAM所带电荷少于BPEI和LPEI，造成包裹miＲNA能力较弱，故形成的复合物粒径也较大。2.2不同复合物凝胶阻滞电泳复合物凝胶电泳阻滞分析可以看出(图3)，3种复合物的N/P值在1时，miＲNA不能被3种材料包裹，可随着电场进行迁移，与核酸探针结合后，在紫外线照射下，可以看到清晰的条带。当3种复合物的N/P值在5时，miＲNA可以完全被包裹，阻止其在电场中的迁移;同时，由于miＲNA可以被完全包裹，不能被与核酸探针结合，故在紫外线照射的情况下，未见条带显出。图1不同N/P比3种复合物粒径．n=3，x珋±sBPEI/miＲNA与PAMAM/miＲNA相比，1)P＜0.01;LPEI/miＲNA与PAMAM/miＲNA相比，2)P＜0.01Fig.1SizesofB/miＲ，P/miＲandL/miＲcomplexesatvari-ousN/Pratios．n=3，x珋±s1)P＜0.01，BPEI/miＲNAvsPAMAM/miＲNA;2)P＜0.01，LPEI/miＲNAvsPAMAM/miＲNA图2不同N/P比3种复合物Zeta电位．n=3，x珋±sFig.2ZetapotentialsofB/miＲ，P
治觯琍＜0.05则认为存在显著性差异。涉及统计学分析，均采用SPSS18.0软件完成。2结果2.1不同N/P比下复合物粒径和Zeta电位3种复合物粒径随着N/P比的增大而降低(图1)，Zeta电位随着N/P比的增大而增加(图2)，说明随着N/P比的增大，载体所带电荷增加，使得复合物包裹更加紧密。当N/P比为5时，PAMAM/miＲ粒径分别与BPEI/miＲ和LEI/miＲ有显著性差异(P＜0.01)。可能是由于PAMAM所带电荷少于BPEI和LPEI，造成包裹miＲNA能力较弱，故形成的复合物粒径也较大。2.2不同复合物凝胶阻滞电泳复合物凝胶电泳阻滞分析可以看出(图3)，3种复合物的N/P值在1时，miＲNA不能被3种材料包裹，可随着电场进行迁移，与核酸探针结合后，在紫外线照射下，可以看到清晰的条带。当3种复合物的N/P值在5时，miＲNA可以完全被包裹，阻止其在电场中的迁移;同时，由于miＲNA可以被完全包裹，不能被与核酸探针结合，故在紫外线照射的情况下，未见条带显出。图1不同N/P比3种复合物粒径．n=3，x珋±sBPEI/miＲNA与PAMAM/miＲNA相比，1)P＜0.01;LPEI/miＲNA与PAMAM/miＲNA相比，2)P＜0.01Fig.1SizesofB/miＲ，P/miＲandL/miＲcomplexesatvari-ousN/Pratios．n=3，x珋±s1)P＜0.01，BPEI/miＲNAvsPAMAM/miＲNA;2)P＜0.01，LPEI/miＲNAvsPAMAM/miＲNA图2不同N/P比3种复合物Zeta电位．n=3，x珋±sFig.2ZetapotentialsofB/miＲ，P/miＲandL/miＲcomplexesatvariousN/Pratios．n=3，x珋±s图3不同N/P比3种复合物凝胶阻滞电泳分析结果1，4，7－BPEI/miＲNA;2，5，8－PAMAM/miＲNA;3，6，9－LPEI/miＲNA.1，2，3－N/P=1;4，5，6－N/P=5;7，8，9－N/P=10Fig.3ＲesultsofagarosegelelectrophoresisofcomplexesatvariousN/Pratios1，4，7－BPEI/mi?
【参考文献】：
期刊论文
[1]YPSMA-1单克隆抗体修饰的树突状高分子前列腺癌靶向基因递送载体[J]. 武鑫,蔡溱,朱全刚,王翔,王晓宇,叶丽华,刘继勇,丁雪鹰,高静,高申. 中国药学杂志. 2012(06)
本文编号：2941461
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