保护性自噬通过激活ERK通路减弱依维莫司在肾癌细胞中的细胞毒性

发布时间：2021-01-07 22:04

　　目的:mTOR途径是治疗癌症的关键靶标,mTOR抑制剂依维莫司（RAD001）已获批准用于治疗肾细胞癌（RCC）。然而,RAD001的疗效却常常受到各种因素的限制,自噬就是其中一个重要的因素。RAD001能够激活细胞产生自噬,而自噬又间接影响着细胞的增殖和凋亡。本研究的目的是通过探讨有关ERK通路的细胞保护性自噬的变化,以研究RCC细胞对RAD001耐药的潜在机制。方法和结果:用不同浓度的RAD001（0、0.001、0.01、0.1、1、10、20μmol/l）处理786-0和A498两种细胞,共同培养不同的时间（0、1、2、4、8h）,并通过WB检测自噬标志物,发现RAD001能够诱导RCC细胞产生自噬,并且遵循剂量和时间依赖性。应用自噬抑制剂CQ处理RCC细胞,通过MTT测定和WB证实,CQ能够有效地增强了RAD001诱导的凋亡,并且证明RAD001诱导的自噬具有细胞保护作用。此外,正如MTT测定,流式细胞学和WB所显示的,RAD001是通过有效激活ERK通路,不是通过激活JNK通路和p38通路而发挥作用。应用ERK抑制剂司美替尼（AZD6244）来抑制ERK通路,它能有效地促进... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：39 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图２．自抑制自噬能够增强Ｒ?

最终诱导自噬。我们通过实验进一步研究ＲＡＤ００１介导ＥＲＫ活化并产生自??噬的机制。在７８６－０和Ａ４９８两种细胞系中，用ＲＡＤ００１处理ＲＣＣ细胞１小时，??我们发现ＥＲＫ通路的下游因子Ｂｅｃｌｉｎ－１和ｐ－Ｂｃｌ－２表达上调（图４Ａ和Ｂ）。此外，??联合应用ＡＺＤ６２４４和ＲＡＤ００１能够显著降低Ｂｅｃｌｉｎ－１和ｐ－Ｂｃｌ－２的表达水平（图??４Ｃ和Ｄ）。这些结果表明，ＲＡＤ００１能够诱导ＥＲＫ信号激活，ＥＲＫ分子传导途径??是通过上调Ｂｅｃｌｉｎ－１和ｐ－Ｂｃｌ－２的表达水平，最终激活自噬。??Ａ?７８６－０?Ａ４９８??ＲＡＤ?（２＿〇ｉ／Ｌ）?Ｏｈ?１ｈ?２ｈ?４ｈ?８ｈ?Ｏｈ?１ｈ?２ｈ?４ｈ?８ｈ??Ｂｅｃｌｉｎ－１?—?■?＿?——麵》?＿＿＿??ｐ－Ｂｄ－２??Ｂｃｌ－２?■丨■?■?－■麵?ｉ??ｐ－ａｃｔｉｎ?？?■?＿?■?？?■?１?■麵■?，?■?一?—１?——－??巳??？Ａ?１ＳＴ?７＆６＿０?Ｏｈ?，?＾?Ａ４９８?Ｏｈ??＊１?ａ?ｉｈ?荖?１?■?ｉｈ??孟?＊?■?２ｈ?Ｓ?＊?■?２ｈ?▲??！：?ｉ??１。上―屋—■』二摩—Ｉ?１醒■?？＂麗??Ｃ?７８６－０?Ａ４９８??—?—?■＋■?■＋？??ＲＡＤ?－＋－＋?－＋－＋??Ｂｅｃｌｉｎ－１?—?ｍｍ?

?重庆医科大学硕士研究生学位论文???２．４?ＥＲＫ通路通过上调ＢｅｃＵｎ－１和ｐ－Ｂｃｌ－２的表达来介导自噬??ＥＲＫ通路能介导Ｂｃｌ－２的磷酸化，导致Ｂｃｌ－２／Ｂｅｃｌｉｎ－ｌ复合物的解离，Ｂｅｃｌｉｎ－１??是自噬启动的关键蛋白［２１］。随着Ｂｃｌ－２／Ｂｅｃｌｉｎ－ｌ复合物的解离，Ｂｅｃｌｉｎ－１含量逐增高，最终诱导自噬。我们通过实验进一步研究ＲＡＤ００１介导ＥＲＫ活化并产生自??噬的机制。在７８６－０和Ａ４９８两种细胞系中，用ＲＡＤ００１处理ＲＣＣ细胞１小时，??我们发现ＥＲＫ通路的下游因子Ｂｅｃｌｉｎ－１和ｐ－Ｂｃｌ－２表达上调（图４Ａ和Ｂ）。此外，??联合应用ＡＺＤ６２４４和ＲＡＤ００１能够显著降低Ｂｅｃｌｉｎ－１和ｐ－Ｂｃｌ－２的表达水平（图??４Ｃ和Ｄ）。这些结果表明，ＲＡＤ００１能够诱导ＥＲＫ信号激活，ＥＲＫ分子传导途是通过上调Ｂｅｃｌｉｎ－１和ｐ－Ｂｃｌ－２的表达水平，最终激活自噬。??Ａ－Ａ４９８??


本文编号：2963322