HMGB1-MAPK信号通路在高糖介导的腹膜间皮细胞炎症因子表达中的作用
发布时间：2021-01-11 16:49
背景腹膜透析（peritoneal dialysis,PD）是终末期肾脏疾病肾脏替代治疗方式之一。但是长期暴露于非生理性的腹透液可引起腹膜组织发生纤维化（peritoneal fibrosis,PF）,最终导致超滤衰竭。腹透液中所含的高浓度葡萄糖是腹膜病变的重要始动和促进因素。高糖环境下,腹膜间皮细胞表达多种细胞因子及趋化因子,在腹膜炎症及纤维化过程中有重要作用。高迁移率蛋白B1（high mobility group B1,HMGB1）是一种广泛存在于真核细胞的核内因子,同时也是一种重要的炎症介质,与腹膜炎症发生密切相关。目的本课题重点探究内源性的HMGB1在高糖介导的腹膜间皮细胞炎症反应中的地位,明确HMGB1参与腹膜间皮细胞炎症因子表达的可能机制。方法使用人腹膜间皮细胞系HMrSV5作为研究对象。通过体外细胞培养,观察高糖环境下细胞内HMGB1的定位变化;检测细胞在高糖以及重组HMGB1蛋白刺激条件下细胞炎症因子表达变化,并使用小干扰RNA沉默间皮细胞内HMGB1,检测HMGB1沉默后细胞在高糖环境下炎症因子的表达变化;最后,检测HMGB1刺激体系中腹膜间皮细胞内MAPK信号通路...
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
光镜下间皮细胞的形态学特点，细胞呈集落样生长，融合后呈铺路石状
1.3.2 高浓度葡萄糖可导致腹膜间皮细胞内 HMGB1 表达减少细胞内的 HMGB1 通常完全位于细胞核内，但在某些刺激因素的作用下，细胞核内的 HMGB1 可从细胞核内转移出来。为观察高糖刺激条件下腹膜间皮细胞内HMGB1 的表达变化，我们使用不同浓度（84mM、138mM、236mM）的高葡萄糖培养基培养间皮细胞。高糖刺激 48 小时后，用 Western Blot 检测细胞内 HMGB1 的表达。如图 3 所示，随着葡萄糖浓度的增加，细胞内 HMGB1 的表达逐渐减少。其中葡萄糖浓度为 236mM 的高糖培养基培养的间皮细胞胞内 HMGB1 含量下降最明显，因此选取 236mM 的培养基培养不同时间，以观察胞内 HMGB1 的含量的时间变化。结果显示，随着培养时间的增加，间皮细胞内 HMGB1 水平随之递减（图 3）。同时，如此高浓度的葡萄糖必然伴随着高渗透压，为验证高糖刺激条件下腹膜间皮图 2. HMrSV5 细胞同时表达上皮细胞的标志蛋白 Cytokeratin-18, E-cadherin 以及间质细胞的标志蛋白 Vimentin
1.3.3 高浓度葡萄糖刺激下腹膜间皮细胞核内 HMGB1 含量减少而细胞质内HMGB1 表达增加为进一步观察高糖对腹膜间皮细胞 HMGB1 的表达的影响，我们进行免疫荧实验对 HMGB1 的细胞定位进行直接的观察。之前的实验发现，细胞内的 HMGB1葡萄糖浓度为 236mM 的高糖培养基中 48 小时 HMGB1 含量有明显下降，因此选该浓度及时间点对细胞内 HMGB1 的定位进行免疫荧光染色，同浓度的甘露醇溶作为渗透压对照。结果发现，高糖组的腹膜间皮细胞核内 HMGB1 荧光密度明显降，伴随着细胞质内 HMGB1 的荧光密度增加，而渗透压对照组和空白对照组图 3. 不同浓度的高糖培养基（84mM、138mM、236mM）培养细胞 48 小时后，细胞内 HM达下降，且呈浓度依赖性（上）；腹膜间皮细胞在含葡萄糖 236mM 的高糖培养基培养 06h、12h、24h、48h，细胞内 HMGB1 含量随培养时间的延长而下降（中）；含 236mM 的葡培养细胞 48h，同浓度的甘露醇作为渗透压对照，高浓度的甘露醇不会引起细胞内 HM表达下降（下）
本文编号：2971137
【文章来源】：上海交通大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：51 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
光镜下间皮细胞的形态学特点，细胞呈集落样生长，融合后呈铺路石状
1.3.2 高浓度葡萄糖可导致腹膜间皮细胞内 HMGB1 表达减少细胞内的 HMGB1 通常完全位于细胞核内，但在某些刺激因素的作用下，细胞核内的 HMGB1 可从细胞核内转移出来。为观察高糖刺激条件下腹膜间皮细胞内HMGB1 的表达变化，我们使用不同浓度（84mM、138mM、236mM）的高葡萄糖培养基培养间皮细胞。高糖刺激 48 小时后，用 Western Blot 检测细胞内 HMGB1 的表达。如图 3 所示，随着葡萄糖浓度的增加，细胞内 HMGB1 的表达逐渐减少。其中葡萄糖浓度为 236mM 的高糖培养基培养的间皮细胞胞内 HMGB1 含量下降最明显，因此选取 236mM 的培养基培养不同时间，以观察胞内 HMGB1 的含量的时间变化。结果显示，随着培养时间的增加，间皮细胞内 HMGB1 水平随之递减（图 3）。同时，如此高浓度的葡萄糖必然伴随着高渗透压，为验证高糖刺激条件下腹膜间皮图 2. HMrSV5 细胞同时表达上皮细胞的标志蛋白 Cytokeratin-18, E-cadherin 以及间质细胞的标志蛋白 Vimentin
1.3.3 高浓度葡萄糖刺激下腹膜间皮细胞核内 HMGB1 含量减少而细胞质内HMGB1 表达增加为进一步观察高糖对腹膜间皮细胞 HMGB1 的表达的影响，我们进行免疫荧实验对 HMGB1 的细胞定位进行直接的观察。之前的实验发现，细胞内的 HMGB1葡萄糖浓度为 236mM 的高糖培养基中 48 小时 HMGB1 含量有明显下降，因此选该浓度及时间点对细胞内 HMGB1 的定位进行免疫荧光染色，同浓度的甘露醇溶作为渗透压对照。结果发现，高糖组的腹膜间皮细胞核内 HMGB1 荧光密度明显降，伴随着细胞质内 HMGB1 的荧光密度增加，而渗透压对照组和空白对照组图 3. 不同浓度的高糖培养基（84mM、138mM、236mM）培养细胞 48 小时后，细胞内 HM达下降，且呈浓度依赖性（上）；腹膜间皮细胞在含葡萄糖 236mM 的高糖培养基培养 06h、12h、24h、48h，细胞内 HMGB1 含量随培养时间的延长而下降（中）；含 236mM 的葡培养细胞 48h，同浓度的甘露醇作为渗透压对照，高浓度的甘露醇不会引起细胞内 HM表达下降（下）
本文编号：2971137
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