免疫性睾丸炎生精障碍和胰岛素调控下丘脑—垂体—性腺轴功能的分子机制

发布时间：2021-01-17 01:25

　　[研究目的]探索IgGFc区域Asn297位点糖基化异常引发免疫性睾丸炎的分子机制,以及曲细精管中白细胞产生过多的ROS抑制抗氧化剂,损伤精原细胞DNA和精子质膜的机制。[研究方法]本研究收集127例免疫性睾丸炎患者的血清样本,单分子实时（Single-molecule real-time,SMRT）环状一致测序（Circular consensus sequencing,CCS）用于 IgG 的Fc区域Asn297位点蛋白结构序列数据分析,求出蛋白质片段的氨基酸出现频率的香农熵值,获得突变位点,Sanger测序验证Asn297基因突变位点的正确性。荧光酶标仪检测精液ROS的含量,并结合生化检查、组织病理和免疫组化检查结果,综合分析并阐述免疫性睾丸炎的发病机制。[研究结果]患者血清IgG浓度为2231.4±291.5mg/dl,高于正常范围80～1400mg/dl,而38例对照组为386.3±182.6mg/dl。患者血清50%溶血单位补体（CH50）浓度为128.32±61.51 U/ml,显著高于正常值（23～46 U/ml）,而对照组相应浓度为31.43±8.37 U/ml。患者... 

【文章来源】：北京协和医学院北京市 211工程院校 985工程院校

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图－１湿转“三明治”装配示意图??ＤｔＳ？°＇?？??酶＿???

检验显示试验组与对照组的平均值比较，差异有统计学意义（ｐ＜０．０５）。免疫组织??化学染色显示大量的ＩｇＧ＋淋巴浆细胞浸润在睾丸、附睾和鞘膜组织内。典型病例的??病理组织和免疫组化染色结果如图２所示。??Ｈ嗎?—??＇?＇４??酬二：??；；？??图２．睾丸组织典型的病理表现??ａ．鞘膜组织内免疫复合物沉积和大量淋巴浆细胞浸润。小血管壁增厚，血管腔内有??大量中性粒细胞。??ｂ．睾丸组织间质内细胞成分增多，密集的淋巴浆细胞浸润（白箭头示）和细纹状纤??维化，ＨＥ染色，４００倍；??３０??

我们进行了?ＩｇＧＶＨ?Ｆｃ区域第６号外显子（３００４５０?ｂｐ）?Ｐ?ＣＲ靶向扩增的ｃＤＮＡ??文库，利用ＩｇＧ的Ｆｃ区域特异性引物３瑞（５ＬＣＣＣＴＣＣＴＣＴＴＴＧＴＧＣＴＳＴＣＡ－３０，??分析ＰＣＲ产物的Ｓａｎｇｅｒ测序（图４）。发现９６例患者存在Ａｓｎ２９７位点的确切突变。??有３６例患者在Ａｓｎ２９７位点（ＣＡＣ）突变为（ＡＡＣ）。第６号外显子８９１密码子的??突变是Ａ到Ｃ的替换，这导致了这种氨基酸从天冬酰胺转化为其他的氨基酸。３１??例患者第６号外显子的８９２密码子存在病理性突变，即天冬酰胺（ＡＡＣ）转变为丝??氨酸（ＡＧＣ）。２９例ＩｇＧ基因插入或删除的移码突变。３１例没有证据表明在Ａｓｎ２９７??基因突变，他们可能有其他位点基因突变，尚未检出。与此相反，对３８名健康男??性的ＩｇＧ基因没有检测到突变。根据ＧｅｎＢａｎｋ中公开发表的结果，Ａｓｎ２９７位点的??天冬酰胺突变发生在健康人中是非常低的。??Ａ?Ｂ??Ｎ＿ａｌ?—ａｌ／＼Ａ?八―—＇／Ｖ’ａａＡ??ｃｃａｇａａＥｃａｇｔｇ?ｃ?ｃＩｇ＂＂?ｃ?ｃ＂?ｇｔｇ??８９１ａ＞〇ａＡ＾ａ＾ｍｉ?—赢Ａ?ｈ必??■?？■■■■?＿■?■■■■■??ＣＣＡＧＣｋＣＣＡＧＴＧ?Ｃ?Ｃ?ｋ?Ｇ?Ａ?Ｇ?Ｃ?Ｃ?Ａ?Ｇ?Ｔ?Ｇ??图４．?ＩｇＧ基因序列Ａｓｎ２９７突变。（Ａ）测序结果表明，在基因第６号外显子８９１位??密码子Ａ突变为Ｃ


本文编号：2981918